论文部分内容阅读
目的构建前列腺癌细胞TNFAIP8基因过表达与沉默模型,观察TNFAIP8基因高表达对前列腺癌细胞PC3、LNCaP的增殖促进作用及其可能机制。方法选用正常前列腺上皮细胞RWPE1、前列腺癌细胞PC3、LNCaP为实验对象,MTT实验观察细胞的增殖能力,ELISA试剂盒检测细胞的葡萄糖消耗及ATP产生,qPCR及Western Blotting检测TNFAIP8基因的mRNA和蛋白表达情况。使用脂质体转染技术构建TNFAIP8基因过表达与沉默模型,分为空载体转染组与TNFAIP8基因过表达组、对照组与TNFAIP8基因沉默组,观察细胞增殖,检测葡萄糖消耗及ATP产生,Seahorse XFp生物能量分析仪检测细胞线粒体呼吸功能的变化,qPCR及Western Blotting检测与葡萄糖代谢有关酶HK1、Glut1、G6PD、AMPK、LDHA的变化。结果(1)与前列腺上皮细胞RWPE1相比,前列腺癌细胞PC3、LNCaP的增殖能力更强,PC3细胞葡萄糖消耗、LNCaP细胞ATP产生能力更强。PC3及LNCaP细胞内源性TNFAIP8基因mRNA表达均较低,LNCaP细胞内源性TNFAIP8基因蛋白的表达低。(2)过表达TNFAIP8基因,与空载体组相比,三种细胞增殖及克隆团形成能力均增强、葡萄糖消耗增强、ATP产生增多。PC3及LNCaP细胞过表达组线粒体呼吸功能增强。RWPE1细胞的葡萄糖代谢酶HK1、Glut1、AMPK、LDHA的mRNA表达较空载体组增加;HK1、Glut1、AMPK蛋白表达较空载体组增加,G6PD未见表达。PC3细胞过表达组的酶HK1、Glut1、LDHA的mRNA表达较空载体组增加;Glut1、G6PD、AMPK蛋白表达增加。LNCaP细胞过表达的AMPK、LDHA mRNA表达较空载体组增加;Glut1、AMPK蛋白表达降低,G6PD未见表达。(3)对TNFAIP8基因沉默表达,与对照组相比,RWPE1细胞、PC3细胞及LNCaP细胞沉默组的葡萄糖消耗降低。PC3细胞及LNCaP细胞沉默组ATP产生减少。前列腺癌细胞线粒体呼吸功能均较阴性对照组降低。葡萄糖代谢酶HK1、Glut1、G6PD、AMPK、LDHA的mRNA表达较对照组均减少。PC3细胞及LNCaP细胞TNFAIP8基因沉默组HK1、AMPK蛋白表达下降。结论(1)TNFAIP8基因高表达促进前列腺癌细胞PC3、LNCaP的增殖。(2)TNFAIP8基因高表达增强前列腺癌细胞PC3、LNCaP的葡萄糖消耗、ATP产生及线粒体呼吸功能。(3)TNFAIP8基因通过调节葡萄糖代谢酶的表达来增强前列腺癌细胞PC3、LNCaP的葡萄糖代谢,这可能是TNFAIP8基因高表达促进前列腺癌细胞PC3、LNCaP的增殖的主要环节。