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目的:研究骨肉瘤细胞Lnc RNA MALAT1的表达水平,探究Lnc RNA MALAT1通过HIF-1a及EZH2/β-catenin通路调控骨肉瘤发展的机制,以及通过下调MALAT1进而抑制骨肉瘤发展的可能性。方法:体外实验,(1)我们采用MNNG/HOS骨肉瘤细胞株,RT-PCR检测Lnc RNA MALAT1的表达。(2)通过siMALAT1,mTOR抑制剂雷帕霉素、激动剂MHY1485,HIF-1a抑制剂BAY87-2243,在常氧和CoCL2模拟缺氧环境条件下,运用western blot、RT-PCR、ELISA等技术,检测骨肉瘤细胞MALAT1、mTOR磷酸化、HIF-1a、VEGF-A、FGF2表达水平。采用前述多种干预条件下的骨肉瘤细胞培养基处理HMEC-1细胞,通过CCK8实验、Transwell实验、小管形成实验,检测HMEC-1细胞的增殖、迁移、成管能力,揭示该环路调控骨肉瘤细胞促血管新生的机制。(3)采用siMALAT1及GSK343抑制MALAT1及EZH2,通过CCK8实验、Transwell实验、流式细胞仪检测两者对骨肉瘤细胞增殖、迁移、耐血清饥饿能力的抑制作用;通过western blot检测两者对骨肉瘤细胞中E-Cadherin及β-catenin表达量及在细胞膜、细胞质和细胞核空间分布的影响,对Wnt通路下游c-Myc表达的抑制作用。体内实验,通过BALB/c裸鼠建立异位骨肉瘤模型,设置siMALAT1组(瘤内注射)和对照组,(1)测量瘤体体积,免疫荧光检测Ki67、cleaved caspase-3、VEGF-A、CD31的表达,PCR检测MALAT1表达,wstern-blot检测HIF-1a表达,分析siMALAT1抑制骨肉瘤血管化和进展的能力。(2)免疫荧光检测β-catenin的表达,分析siMALAT1抑制β-catenin通路,降低骨肉瘤抗凋亡活性。结果:体外实验:(1)Lnc RNA MALAT1在骨肉瘤细胞中高表达;(2)下调骨肉瘤细胞MALAT1能抑制mTOR的激活和HIF-1a的表达,抑制VEGF-A、FGF2的表达;其抑制作用能被mTOR激动剂MHY1485消除。抑制mTOR或HIF-1a均能部分降低Lnc RNA MALAT1的表达,提示Lnc RNA MALAT1/mTOR/HIF-1a环的存在。抑制该环能够抑制骨肉瘤促进血管内皮细胞增殖、迁移、成管的生物学活性;(3)siMALAT1及GSK343对骨肉瘤细胞增殖、迁移、耐血清饥饿的抑制能力相似,提示Lnc RNA MALAT1/EZH2轴的存在;抑制该轴能够促进E-Cadherin的表达,抑制β-catenin及其下游c-Myc的表达,并降低β-catenin在细胞核的含量,抑制Wnt信号通路。体内实验进一步验证了体外试验的结果,并发现siMALAT1可抑制体内骨肉瘤的生长,抑制血管新生和β-catenin的表达,促进其凋亡。结论:Lnc RNA MALAT1可通过Lnc RNA MALAT1/mTOR/HIF-1a环调控骨肉瘤细胞的增殖和血管化,并可通过Lnc RNA MALAT1/EZH2/β-catenin通路促进骨肉瘤细胞增殖、迁移和抗凋亡活性。同时,MALAT1也是治疗骨肉瘤的潜在靶点,利用RNA干预的方法抑制MALAT1具有临床应用的前景。