连翘提取物(单体及单体最佳配比)对脓毒症大鼠的疗效评价

来源 :天津医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:herirong
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目的:观察连翘提取物(单体)对脓毒症大鼠术后48h、72h及1周存活率的影响,初步筛选出最有效的前3种单体;引用单味中药有效单体(组效-量效)配伍的理念,运用正交设计的研究方法,得出最佳组份及配比;观察最佳配比对脓毒症大鼠血清内毒素、肿瘤坏死因子-α、白介素1、白介素6等炎症介质的影响及对凝血机制、肝肾功能等方面的影响。方法:(1)采用大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)模型,术前12h禁食,不禁水,5%水合氯醛麻醉(350-400mg/kg)腹腔麻醉,麻醉满意后,前腹正中备皮,消毒腹部皮肤,于腹部正中做2.5cm切口,取出盲肠后,游离肠系膜和盲肠,距盲、回肠结合部约盲肠全长1/3处,4号手术缝线尽量回避血管结扎,于距结扎处远端约0.8-1cm处回避血管,三棱针(2.6x65mm)贯穿孔,3x30mm胶条贯穿盲肠留滞,放回腹腔,缝合切口。术后颈部皮下补液10mmL,补充术中液体流失,抗休克;(2)分三个梯度(20%乙醇、50%乙醇、80%乙醇)分别对连翘进行提取,得到三种对应的连翘粗提取物后,分别予大鼠给药,观测大鼠48h、72h及1周的存活情况,选择对脓毒症大鼠最有效的连翘粗提取物,并以此实验结果为基础,对有效的连翘粗提取物进行进一步的单体提取,提纯连翘提取物混合成份中含量最多的4种成份,用连翘提取物混合成分中含量最多的4中成份分别进行动物实验,通过尾静脉注射给药的方法,观察各单体对脓毒症大鼠48h及72h的死亡率及生存时间的影响,初步筛选出对治疗脓毒症大鼠有效的单体;(3)对筛选出治疗脓毒症大鼠有效的单体,通过动物实验,运用正交设计,得出对脓毒症大鼠有治疗作用的3种单体的(组效-量效)关系,寻找最佳配比;(4)采用化学鉴别、核磁共振氢谱(1H-NMR)、核磁共振碳谱(13C-NMR)、薄层色谱(TLC)、高效液相色谱(HPLC)等光谱色谱方法对所分离出的四个化合物进行结构鉴定,确定化合物的结构和名称(主要由天津药物研究院完成);(5)通过动物实验,运用酶联免疫法及检验,研究连翘有效单体最佳配比对脓毒症大鼠术后24h、48h、72小时TNF-α、IL-1β、LPS、IL-6,血常规,肝肾功能,凝血机制的影响。结果:(1)50%连翘粗提取物对脓毒症有很好的治疗作用,能够在一定程度上降低脓毒症大鼠的死亡率,并相对延长脓毒症大鼠的生存时间;(2)记录9种不同产地连翘的指纹图谱;(3)分离出的四种化合物由鉴定可得出,一个木脂素类(连翘苷)、一个苯乙醇苷类(连翘酯苷A)、两个黄酮类(芦丁和槲皮素),连翘苷、连翘酯苷A及槲皮素均能降低脓毒症大鼠术后48h、72h及1周的死亡率,并相对延长脓毒症大鼠的生存时间;(4)单体连翘苷、连翘酯苷A及槲皮素在治疗脓毒症大鼠模型中的最佳配比为2:3:3;(5)在脓毒症病程的早期,连翘提取物能够拮抗机体炎症介质释放,活白细胞及凝血系统来阻止病原微生物(如细菌)的进一步扩散。结论:(1)50%连翘粗提取物对脓毒症大鼠有一定的治疗作用,能够在一定程度上降低脓毒症大鼠的死亡率,并相对延长脓毒症大鼠的生存时间;(2)连翘苷、连翘酯苷A及槲皮素组对脓毒症大鼠有很好的治疗作用;(3)单体连翘苷、连翘酯苷A及槲皮素在治疗脓毒症大鼠模型中的最佳配比为2:3:3。(4)连翘提取物能通过改善机体炎症反应、微血管凝血及血管内皮细胞损伤等因素,提高脓毒症大鼠的存活率。
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