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第一章LKB1基因慢病毒表达载体的构建与鉴定【摘要】目的:探讨慢病毒系统介导的LKB1基因在HEC-1A细胞中的过表达，为进一步研究LKB1基因在子宫内膜癌的作用机制奠定基础。方法:以PCR扩增LKB1克隆质粒获得全长cDNA，将LKB1cDNA链接到慢病毒载体pWPI，构建慢病毒表达质粒LKB1/pWPI。通过与包装质粒pCMV-Dr8.74和pMD2.G共转染293T细胞进行病毒包装，用包装成功后的病毒液侵染子宫内膜癌HEC-1A细胞，荧光定量PCR法检测HEC-1A细胞中LKB1的相对表达量。结果：成功扩增LKB1全长cDNA，和构建LKB1重组慢病毒表达载体LKB1/pWPI。转染包装293T细胞后能产生慢病毒颗粒并能有效感染靶细胞HEC-1A。转染后HEC-1A-LKB1-PWPI细胞中LKB1的表达率明显高于亲本细胞和空白对照细胞（p＜0.01）。结论：成功构建携带LKB1基因的慢病毒表达载体，包装病毒后能有效地感染子宫内膜癌HEC-1A细胞，为进一步探讨LKB1基因在子宫内膜癌中的生物学效应奠定基础。第二章LKB1基因对子宫内膜癌HEC-1A细胞生物学影响的体外实验研究目的：探索子宫内膜癌HEC-1A细胞中LKB1基因表达上调后对其生物学功能的影响。方法：平板克隆实验检测三组细胞（LKB1-pWPI-HEC-1A、pWPI-HEC-1A、HEC-1A）的单克隆能力，MTT测定三组细胞的生长增殖情况，流式细胞术检测三组细胞的生长周期。结果：实验组细胞（LKB1-pWPI-HEC-1A）与两对照组（pWPI-HEC-1A、HEC-1A）比较：①实验组细胞单克隆能力较两个对照组减弱（P＜0.05）。②实验组细胞生长速度较两个对照组减慢（P＜0.05）。③实验组细胞G0/G1期细胞的比例明显高于两个对照组（P＜0.05）。结论：LKB1基因抑制了HEC-1A细胞的单克隆能力，同时其对于子宫内膜癌HEC-1A细胞的生长起到抑制作用，将细胞周期阻滞于G0/G1期。