【摘 要】
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目的:围产期（Periparturient period）是奶牛内分泌、能量代谢和免疫系统发生剧变的时期,是营养代谢性和感染性疾病高发期。奶牛酮病（Ketosis）是围产期发病率最高、造成损失最大的疾病之一,以血液高非酯化脂肪酸（Non-esterified fatty acids,NEFA）和高β-羟丁酸（β-hydroxybutyric acid,BHBA）为特征。酮病发病机制的研究取得了长足
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目的:围产期（Periparturient period）是奶牛内分泌、能量代谢和免疫系统发生剧变的时期,是营养代谢性和感染性疾病高发期。奶牛酮病（Ketosis）是围产期发病率最高、造成损失最大的疾病之一,以血液高非酯化脂肪酸（Non-esterified fatty acids,NEFA）和高β-羟丁酸（β-hydroxybutyric acid,BHBA）为特征。酮病发病机制的研究取得了长足进展,但其预警和治疗还存在困难。目前绝大多数研究聚集高NEFA的脂毒性,对于血清NEFA组成（即各NEFA组分占总NEFA的质量比）对相关疾病发生发展的报道鲜见。因此,本研究旨在比较临床型酮病、亚临床型酮病及健康奶牛的血清NEFA组成,以期为筛选酮病预警指标提供依据,并为进一步揭示酮病发病机制奠定理论基础。方法:在同一奶牛场,挑选胎次和哺乳天数相近的荷斯坦母牛,进行临床检查和实验室诊断。采集奶牛血液样本,使用商品化试剂盒,检测血清BHBA、葡萄糖（GLU）和NEFA浓度。根据BHBA浓度进行分组:血清BHBA浓度＞3 mM者分为临床酮病组（CK,n=12）;1.2 mM≤BHBA浓度≤3 mM分为亚临床酮病组（SCK,n=15）;BHBA浓度＜1.2 mM且无临床症状者分为健康组（CON,n=15）。颈静脉采血后,血清样本用甲醇-正己烷法进行脂类提取。使用固相萃取法（Solid phase extraction,SPE）,用样本过柱,加入无水乙醚:冰醋酸（95:5,V:V）洗脱收集纯化后NEFA。利用5%浓硫酸/甲醇溶液孵育进行甲酯化衍生,加入正己烷和饱和氯化钠溶液,收集上清液。通过质控后再用气相色谱-质谱联用仪（Gas chromatography-mass selective detector,GC-MSD,7890A/GC-5975C,Agilent）检测。有关计算公式:样品浓度=混标浓度×（样品峰面积/混标峰面积）/样品浓缩倍数;样品质量=样品浓度×甲酯化后加入的提取剂体积×（提取剂体积/过柱体积）×转换系数。结果:CK组、SCK组和CON组间血清BHBA、GLU和NEFA浓度存在差异（P＜0.05）。CK组BHBA浓度（3.81±0.62 mM）最高,SCK组次之（1.81±0.45 mM）,CON组最低（0.64±0.21 mM）。CK组NEFA浓度（1.12±0.26 mM）最高,SCK组次之（0.73±0.13 mM）,CON组最低（0.49±0.09 mM）。CK组GLU浓度（1.86±0.30mM）最低,SCK组（2.48±0.41 mM）高于CK组,CON组（2.97±0.26 mM）最高。BHBA与GLU、GLU与NEFA存在负相关性（r=-0.8,r=-0.76）;BHBA与NEFA存在正相关性（r=0.9）。在奶牛血清中共检测出16种FA,其中浓度最高的是C16:0、C18:0和C18:1n9。有7种FA存在统计学差异,其中CON组C10:0%、C12:0%、C16:0%、C18:0%和C22:1n9%显著高于SCK组和CK组（P＜0.05）,但C17:0%以及C18:1n9%显著低于SCK组和CK组（P＜0.05）;CK组单不饱和脂肪酸百分比（MUFA%）和不饱和脂肪酸百分比（UFA%）高于SCK组和CON组（P＜0.05）,但饱和脂肪酸（SFA%）和饱和脂肪酸/不饱和脂肪酸SFA/UFA最低;CK组和SCK组C18:1n9/C12:0和C18:1n9/C22:1n9的比值显著高于CON组（P＜0.05）。C18:1n9与C17:0（r=0.93）、C18:0与C20:0（r=0.88）以及C18:3n3与C18:2n6（r=0.88）存在相关性。结论:酮病奶牛和健康奶牛血清NEFA组成存在差异。酮病奶牛血清C18:1n9/C12:0和C18:1n9/C22:1n9有用作酮病预警指标的潜质。
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