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精液保存是人工授精技术的关键环节,对于提高优良品种的利用率,推进家畜的遗传改良工作有重要意义。目前,绵羊精液低温保存仍存在保存时间短、受胎率低等问题。为了减少绵羊精液低温保存过程中精子的氧化损害,提高保存质量并延长保存时效,我们在绵羊低温保存稀释液中添加Tempol(超氧化物歧化酶衍生物)和Apigenin(天然黄酮类抗氧化剂),探讨这两种抗氧化剂对绵羊精液低温保存效果的影响,为绵羊精液低温保存及其应用提供依据。本试验以Tris-果糖-柠檬酸为基础稀释液,采用逐步降温法进行降温,并向基础稀释液中分别添加0、2.5、5、10、20、100μM Tempol和0、5、10、15、20、100μM Apigenin,及0+15、2.5+15、5+15、5+0、5+10、2.5+10μM Tempol+Apigenin配伍组合,分别在5℃条件下保存7 d,每隔24 h检测精子运动能力指标、质膜完整性,每隔48 h检测线粒体活性、精清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。主要研究结果:1.在基础稀释液中添加一定浓度Tempol可以提高低温保存的精液质量。其中,低温保存3-7 d,5μM处理组的精子活力、活率均显著高于对照组(P<0.05);保存3-5 d,5μM处理组的线粒体活性显著高于对照组(P<0.05);保存4-6 d,5μM处理组的F型精子显著高于对照组(P<0.05);在此期间,其它处理组也均高于对照组,但组间差异不显著(P>0.05)。除此之外,各处理组的SOD活性在低温保存期间也均显著高于对照组(P<0.05);各处理组的MDA含量在保存期间均低于对照组,5μM组与对照组差异最为显著(P<0.05)。表明,Tempol的最适添加浓度为5μM,保存7 d后精子活力仍可达46.77%,质膜完整率可达66.40%,线粒体活性可达45.46%。2.在基础稀释液中添加一定浓度Apigenin可以提高低温保存的精液质量。其中,低温保存3-7 d,15μM处理组的精子活力、活率、线粒体活性均显著高于对照组(P<0.05);保存2-6 d,15μM处理组的F型精子显著高于对照组(P<0.05);在此期间,其它各处理组也均高于对照组,但组间差异不显著(P>0.05)。除此之外,各处理组的SOD活性在低温保存期间也均显著高于对照组(P<0.05);各处理组的MDA含量在保存期间均低于对照组,15μM组与对照组差异最为显著(P<0.05)。表明,Apigenin的最适浓度为15μM,保存7 d后精子活力仍可达52.24%,质膜完整率可达47.80%,线粒体活性可达57.15%。3.在基础稀释液中联合添加Tempol和Apigenin具有协同作用,2.5+15μM、5+10μM和2.5+10μM处理组低温保存期间联合添加的效果明显优于单一添加的效果。保存3、4d,2.5+15μM、5+10μM和2.5+10μM处理组的精子活率高于两对照组,其中2.5+15μM显著高于对照组(P<0.05);保存期间,2.5+15μM组的F型精子显著高于两对照组(P<0.05);保存3-7 d,2.5+15μM组SOD活性显著高于0+15μM组(P<0.05),MDA含量显著低于0+15μM对照组(P<0.05)。表明,保存效果最佳的为2.5+15μM处理组,保存7 d后精子活力仍可达63.89%,质膜完整率可达55.72%,线粒体活性可达54.08%。5+15μM处理组最低,甚至低于两个添加单一抗氧化剂组。