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研究背景:近几十年来,尽管骨科手术方式和术后支持治疗均有了显著发展,但在骨折患者中,尤其是多发骨折及老年患者术后的死亡率依旧没有明显下降,研究表明其与之后并发的MODS存在关联。骨折患者出现器官损害的因素中,手术所导致的失控性的炎症反应是肺脏损害发生的重要原因。与此同时,过度肺脏损害又可导致机体其他器官发生不同程度的损伤,最终导致多器官功能障碍综合征(Multiple organ dysfunction syndrome,MODS)。由此可见,骨折后引起的失控性炎症反应综合征可导致术后急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)或急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS),若这一损伤发展为不可逆的程度,则可导致肺部并发症的发生,最终引发患者呼吸功能衰竭并启动MODS。Moore等人曾提出“二次打击”假说。根据该假说,骨折被认为是初次打击并使机体致敏,这时再遭受感染或非感染因素损害就会导致进一步的损伤,造成第2次打击,从而导致ALI/ARDS甚至MODS。而在临床工作中,内毒素血症,尤其是因革兰阴性杆菌所引起的类型发生率较高。约7成的ALI与内毒素血症和气管吸入异物有关,其中气管误吸也是感染的高危因素之一。因脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)是细菌内毒素的主要致炎成分之一,故本研究选用小鼠气管插管滴注LPS作为第2次打击的感染源,更好模拟临床肺部感染所致ALI。海洋微生物已被很多文献和研究证明为一个重要的新型药物来源,越来越多的报告证明海洋真菌具有独特的生物活性。Aspernolide E为海洋真菌土曲霉中提取出的小分子化合物,前期研究中发现其具有一定的抗炎作用,本论文中进一步研究了其在细胞层面和ALI动物模型中的抗炎效果及作用机制。目的:探索研究AspernolideE在体内及体外对炎症的治疗效果和其作用机制,探究其用于临床骨折后ALI治疗的可能性。研究方法:第一章:Aspernolide E对RAW264.7细胞炎症反应模型的影响及其机制:以体外培养的RAW264.7细胞为研究对象,首先利用MTT实验测定Aspernolide E对细胞的毒性大小以评价其应用可能性,随后通过NO抑制实验及ELISA实验检测所培养RAW264.7细胞的上清液中释放的炎症因子的改变。进一步通过Western Blot和IF探究Aspernolide E抗炎效果的作用通路和作用效果。第二章:以雄性C57BL/6小鼠(6-8周龄,20-25g)建立LPS所致ALI小鼠模型,分为空白对照组(control),LPS组,低剂量Aspernolide E干预组和高剂量Aspernolide E干预组。干预组提前24h使用Aspernolide E进行腹腔注射,之后使用气管插管滴注LPS方法造模,并在6小时后脱颈处死小鼠,同时收集小鼠肺脏保存。之后利用部分肺脏甲醛固定后进行HE染色观察炎症性病理改变和IHC观察NF-κ B亚基p65的表达情况。其余肺脏通过液氮研磨提取蛋白后利用Western Blot实验检测炎症相关蛋白iNOS及NF-κ B亚基p65的表达情况。结果:1.加入LPS处理后的RAW264.7细胞所释放的NO,IL-6和TNF-α水平较空白组显著增加(P均<0.05),在使用Aspernolide E干预后各指标显著降低(P 均<0.05)2.加入LPS处理后的RAW264.7细胞中iNOS及NF-κ B通路激活相关蛋白p65、p-p65表达水平较空白组显著增加(P均<0.05),且在使用Aspernolide E干预后各指标显著降低(P均<0.05)3.LPS组所诱导小鼠ALI模型相对空白对照组肺组织表现出明显的炎症性病理学改变,在Aspernolide E干预后炎症改变明显减轻,且低剂量组效果优于高剂量组。4.LPS组所诱导小鼠ALI模型相对空白对照组肺组织中iNOS表达量显著增高,在Aspernolide E干预后iNOS表达量明显下降,且低剂量组效果优于高剂量组。5.LPS组所诱导小鼠ALI模型相对空白对照组肺组织中NF-κ B亚基p65表达量显著增高,在Aspernolide E干预后p65表达量明显下降,且低剂量组效果优于高剂量组。结论:Aspernolide E可以通过抑制NF-κ B通路中p65的磷酸化水平减轻RAW264.7细胞和ALI小鼠模型中的炎症反应。Aspernolide E或可成为一种治疗骨折后ALI的潜在药物。