论文部分内容阅读
目的：通过氯化锂激活宫颈癌Caski细胞Wnt信号通路后，检测Twist基因的mRNA和蛋白水平表达差异，探讨宫颈癌Caski细胞系Wnt信号通路与Twist基因的关系，为宫颈癌的发病机制提供实验依据。方法：体外培养宫颈癌Caski细胞，不同浓度的氯化锂激活Wnt信号通路后，MTT筛选出适宜的激活剂浓度，实验分为7组：对照组（未加氯化锂的Caski细胞）及氯化锂浓度分别为0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025mol/L，分别培养12h、24h， MTT检测各组细胞在不同浓度和时间点细胞生长抑制率，筛选出氯化锂的最低抑制浓度和第二低抑制浓度；Western blot检测Wnt信号通路活化的标志蛋白β-catenin的表达水平。RT-PCR和Western blot检测Caski细胞系在Wnt信号通路激活状态Twist基因的mRNA和蛋白表达水平；实验分为5组：（1）对照组（未加氯化锂的Caski细胞）；（2）氯化锂最低抑制浓度处理12h；（3）氯化锂最低抑制浓度处理24h；（4）氯化锂第二低抑制浓度处理12h；（5）氯化锂第二低抑制浓度处理24h。RT-PCR和Western-blot检测五组细胞中Twist基因的表达情况，分析Wnt信号通路激活状态下Twist基因的mRNA和蛋白的表达水平。结果：1.不同浓度氯化锂处理Caski细胞，在培养12h和24h后，计算得出氯化锂最低抑制浓度和第二低抑制浓度分别为0.05mol/L、0.1mol/L，两组浓度在12h、24h相对应的细胞抑制率为6.600±0.027，4.200±0.063和21.800±0.021，46.200±0.073。2.氯化锂激活Wnt信号通路后，β-catenin的表达水平增高（P<0.01）。3.氯化锂0.05mol/L、0.1mol/L分别处理12h组，氯化锂0.05mol/L、0.1mol/L分别处理24h组中Twist基因的mRNA和蛋白表达水平较对照组均显著升高(P<0.05)，表明Caski细胞系中Wnt信号通路激活后，可以导致Twist基因的表达增高。结论：1.氯化锂作用于Caski细胞后，β-catenin的表达水平增高，说明Wnt信号通路激活。2.在Caski细胞中，氯化锂通过激活Wnt信号通路而促进Twist基因的表达上调。