第一部分RNAi技术干扰人卵巢癌OVCAR3细胞中CD105、ki67基因表达　　目的：检测siRNA干扰前后人卵巢癌OVCAR3细胞中CD105、ki67基因和蛋白表达的变化以确定沉默效果。　　方法：选取CD105-siRNA、Ki67-siRNA并稀释成不同浓度，在脂质体LipofectamineTM2000的介导下转染进入人卵巢癌OVCAR3细胞。实时荧光定量PCR、Western blot方法验证siRNA干扰效果。　　结果：构建并合成CD105-siRNA和 ki67-siRNA及各自的阴性对照序列，并转染进人卵巢癌OVCAR3细胞。　　1、实时荧光定量PCR检测结果显示RNA干扰后人卵巢癌OVCAR3细胞中CD105、ki67两种基因的表达均下降。以空白对照组为基准，CD105-NC组91.64％，转染 CD105-siRNA终浓度为50nmol/L和100 nmol/L组的OVCAR3细胞中CD105mRNA的相对表达水平分别为46.34%和35.23%，明显下降，差异有统计学意义（P＜0.001）；以空白对照组为基准，Ki67-NC组1.03，转染Ki67-siRNA终浓度为50nmol/L和100 nmol/L组的人卵巢癌细胞中Ki67-mRNA的相对表达水平分别为22%和14%，差异有统计学意义（P＜0.001）。　　2、Western Blot图谱结果显示，转染CD105-siRNA、Ki67-siRNA后，OVCAR3细胞中CD105、Ki67蛋白水平均明显降低。　　结论：　　本研究选取的CD105-siRNA、Ki67-siRNA可成功沉默OVCAR3细胞中CD105、Ki67基因和蛋白的表达水平，为第二部分细胞功能学实验提供实验依据。　　第二部分靶向沉默CD105、ki67基因表达前后OVCAR3细胞侵袭能力的改变　　目的：探讨靶向沉默CD105和Ki67基因表达对人卵巢癌OVCAR3细胞侵袭能力的改变来研究CD105、Ki67在卵巢癌发病中的分子作用机制，并分析CD105和Ki67在卵巢上皮癌的发生发展中是否具有一定的相关性，为卵巢癌的基因治疗提供理论依据。　　方法：检测CD105、Ki67单基因干预和联合干预前后穿过 Transwell小室内基质膜的细胞数。　　结果：结果显示：CD105-siRNA组穿膜细胞数（26.8±2.3个），Ki67-siRNA组穿膜细胞数为（32.2±3.9个），和各自的阴性对照组（NC1组45.2±4.3个、NC2组50±3.1个）及空脂质体转染组（50.2±2.5个）相比，穿膜细胞数减少，差异明显（P＜0.01）；联合干预组在高倍视野下平均穿膜细胞数减少更明显（11.8±3.8个），差异存在统计学意义（P＜0.05）。而NC1、NC2组与空白对照组相比，穿过基质膜的细胞数相差不大，差异无统计学意义（P＞0.05）。　　结论：CD105-siRNA和ki67-siRNA沉默CD105、ki67基因和蛋白的表达后，OVCAR3细胞的侵袭能力均明显下降，然而其各自的侵袭能力与联合干预组相比并无明显协同或抵抗效应。但同样能说明CD105、ki67在卵巢上皮癌发展和转移中起一定作用。