福建省两种双生病毒的致病机制研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:hyq20061001
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本文对福建省杂草上的双生病毒进行了鉴定,并对其致病机制作了初步研究。 从福建省福州地区采集了表现有典型双生病毒症状的野葛(Pueraria montana)病样,通用引物PA/PB对野葛样品进行了特异PCR检测,结果发现,样品中有大约500 bp的条带,表明此野葛中极有可能含有双生病毒。随机选择了三个克隆Yg1、Yg2及Yg3进行序列测定,测序结果表明此三个克隆之间的差异极小,核苷酸序列同源性均在98.8%以上(登录号FJ539016,FJ539017和FJ539018),说明此样品很可能是由同一种双生病毒侵染。在此基础上,我们对Yg3样品中的双生病毒的全基因组进行了研究。 通过一对背靠背引物获得了Yg3的全基因组序列,测序表明,Yg3 DNA-A全长2729 nt(登录号FJ539014),具有典型的粉虱传双生病毒特征:共编码6个开放阅读框(open reading frames,ORF),其中正义链编码2个ORFs,分别为AV1和AV2,反义链编码AC1、AC2、AC3和AC4四个ORFs,其茎环结构区含有TAATATTAC保守序列。经NCBI检索和BLAST比对发现,Yg3 DNA-A与野葛花叶病毒DNA-A(Kudzu mosaic virus-[Vietnam:Hoabinh:2005]DNA-A,KuMV-[VN:Hoa:05]DNA-A,登录号DQ641690)同源性最高,为92.9%。 用Beta01/Beta02特异引物并未发现有DNA-β存在,然而用TempliPhiTM Kit试剂盒扩增得到2677 bp的片段(登录号FJ539015),NCBI BLAST比对发现其与野葛花叶病毒DNA-B(Kudzu mosaic virus-[Vietnam:Hoabinh:2005]DNA-B,KuMV-[VN:Hoa:05]DNA-B,登录号DQ641691)同源性最高,为81.7%。由此,我们确定Yg3为野葛花叶病毒(Kudzu mosaic virus,KuMV)的一个分离物,并将其命名为野葛花叶病毒分离物Yg3(Kudzu mosaic virus Yg3 isolate,KuMV-Yg3)。Yg3 DNA-B编码两个ORFs,即反义链上的BC1和正义链上的BV1,同时也含有保守序列TAATATTAC。 为了研究KuMV DNA-A和DNA-B在致病中的作用,我们构建了KuMV-Yg3DNA-A和DNA-B的侵染性克隆,注射本氏烟(Nicotiana benthamiana)后发现,共同接种DNA-A和DNA-B的烟草叶片出现黄色褪绿斑点症状,而单独接种DNA-A或DNA-B的烟草中未出现任何症状。 另外,我们对胜红蓟黄脉病毒福建烟草分离物F2(Ageratumyellow vein virus-F2,AYVV-F2)的DNA-A(登录号EF527823)及其伴随DNA-β(登录号EF527824)及本实验室保存的一个缺陷型DNA-β(ADNA,登录号FJ605171)进行了侵染性克隆的构建,以期对其致病机制进行初步探讨。注射烟草后发现,AYVV-F2 DNA-A+DNA-β或者AYVV-F2 DNA-A+ADNA-β这两种组合都能引起本氏烟(Nicotiana benthamiana)及普通烟(Nicotiana tobacum)轻微的黄脉症状。
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