兔骨髓间充质干细胞与Buffy coat体外软骨分化的比较分析

来源 :延边大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:szzc2001
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目的:比较分析兔骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSC)与含有单核细胞、生长因子和细胞因子等的Buffy coat在体外软骨分化,为Buffy coat治疗软骨损伤提供实验依据。方法:动物选取新西兰系大白兔12只(16周龄,体重3±0.5kg),随机分为:MSC组(阴性对照组,n=3),采集骨髓的间充质干细胞(MSC),不添加转化生长因子-β(Transforing growth factor-β,TGF-β)的诱导下培养。Buffy coat组(实验组,n=6),采用Buffy coat不经过体外的传代培养,在软骨诱导液下培养。MSC+TGF组(阳性对照组,n=3),采集骨髓的间充质干细胞,添加TGF-β的诱导下培养。通过大体观察、组织学观察、糖胺多糖(Glycosaminoglycan,GAG)检测,和体外软骨BERN的评分比较三组在体外分化的能力。结果:1)大体观察:MSC组培养的软骨部分已经溶解,边缘模糊;MSC+TGF组与Buffy coat组基本没有溶解现象,边缘圆润、清晰。2)番红O染色镜下观察:MSC组软骨细胞生长缓慢,分布不均匀,数量极少,有极少量GAG的分泌现象出现,分泌不规则;有少数细胞可以找到软骨细胞特有的Cartilage lacuna结构。Buffy coat组与MSC+TGF组软骨细胞生长速度较快,细胞分布较均匀,细胞数量较多,表面较平整、周围较圆润,有较多GAG分泌现象出现,基本分布在软骨细胞周围;有较多细胞可以找到Cartilage lacuna结构。3)糖胺多糖(GAG)含量测定:MSC 组:7.78± 1.79μg,Buffy coat 组:22.83±3.11μg,MSC+TGF 组:24.05±3.35μg。三组间存有显著差异,MSC 组与 MSC+TGF 组、MSC 与 Buffy coat 组,组间存在显著差异(P<0.05);Buffy coat组与MSC+TGF组,组间无显著差异(P>0.05)。4)体外软骨 BERN 评分:MSC 组:2.83± 1.16,Buffy coat 组:6.16±1.16,MSC+TGF组:6.68±0.81。三组间存在显著差异,MSC组与MSC+TGF组、MSC与Buffy coat组,组间存在显著差异(P<0.05),Buffy coat组与MSC+TGF组,组间无显著差异(P>0.05)。结论:Buffy coat具有良好的体外软骨分化能力,可以解决目前体外分化软骨必须添加生长因子这个难题,为Buffy coat在临床应用提供了实验依据。
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