丙泊酚对大鼠神经干细胞增殖和迁移的调控

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gaofei23
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目的:  观察丙泊酚对怀孕15天(E15)大鼠大脑皮层神经干细胞(NSCs)增殖和迁移的影响并探讨问题其可能机制。  方法:  1、分离E15天SD大鼠大脑皮层进行神经干细胞原代培养。以(1-2)*106/ml细胞密度接种,在含有2% B27,20ng/ml bFGF,20ng/ml EGF的DMEM/F12的培养基中培养,并稳定传至第三代。用Nestin细胞免疫化学染色法鉴定神经干细胞,Nestin阳性率大于95%,表示传至第三代的细胞仍为神经干细胞。  2、将原代培养至第三代的神经干细胞随机分为4组:空白组,终浓度为0.1%的DMSO组,丙泊酚终浓度为20与50uM组,放入培养箱中继续培养12h。  3、取分组的神经干细胞,经药物处理培养2小时后,加入终浓度为10μ M的Edu,继续培养4小时后进行Edu免疫荧光染色,用Edu的阳性率检测神经干细胞的增殖能力。  4、取分组的神经干细胞,经药物处理培养6小时后,收集神经干细胞按照Tirzal试剂的说明书提取各组细胞的总RNA,再将其逆转录为cDNA后,采用荧光实时定量聚合酶链反应法(Real-Time PCR)检测各组样本中Stat3、Sox2和Notch1 mRNA的含量。  5、取分组的神经干细胞,经药物处理培养6小时后,收集各组神经干细胞并提取总蛋白,采用Western blotting法检测Stat3及p-Stat3蛋白含量的表达;  6、取分组的神经干细胞,经药物处理培养6小时后,将神经干细胞接种到Transwell板中,用迁移至小板下室的细胞数量表示神经干细胞的迁移能力。  结果:  1、与空白组相比,Edu免疫荧光染色检测结果表明,丙泊酚组促进了神经干细胞增殖能力(P<0.05);  2、与空白组相比,qPCR检测结果发现,丙泊酚组Stat3与Sox2 mRNA的含量上升显著(P<0.05);  3、与空白组相比,Western blotting检测结果表明,丙泊酚组p-Stat3蛋白的表达量增加(P<0.05),但总Stat3蛋白表达量无变化;  4、与空白组相比,Transwell板检测的结果显示了丙泊酚具有促进神经干细胞迁移的能力(P<0.05)。  结论:  丙泊酚可导致神经干细胞的增殖和迁移能力增加,其可能是通过影响Stat3及Sox2基因的转录和翻译过程实现的。
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