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本试验通过山梨种子和茎段的组织培养,获得了无菌苗叶片。然后以无菌苗叶片为外植体初步建立了山梨叶片的再生体系。并且尝试将基因rolB转入山梨的叶片中。本研究的结果如下: 1、以山梨的种子为材料进行培养表明:种子消毒时间以5分钟为宜,污染少,萌发率高。3天左右种子即可萌发,10天就可以长出小苗。继代30天叶片就可作为外植体使用。不添加激素的MS和V1培养基都可作为山梨种子萌发的培养基。 2、以茎段为外植体进行培养表明:从果园采来的三年生梨树新梢茎段适宜的接种时间为4月份,且用0.1%的升汞消毒以7分钟为宜,腋芽萌发率高,为90%。外植体单芽茎段接种在芽启动培养基MS+1.0～2.5mg/L BA+0.4mg/L IBA上时,10天后叶腋处长出新芽,20天后苗高平均为2.4cm,幼芽长势良好,30天后可继代增殖培养。新芽转接在芽诱导培养基MS+2.0mg/L BA+0.2mg/L上,小苗生长良好,叶片正常,并在基部有增殖芽的出现,增殖系数为3.6。 3、以叶片为外植体培养表明:取继代培养30天左右的无菌苗叶片为材料,接种在MS+5.0mg/L BA+0.4mg/LIBA培养基上,20～30天后产生不定芽,再生频率48.6%,再生芽数3.83;暗培养20天,叶片再生频率最高;远轴面向下的叶片再生频率和再生芽数高于近轴面向上的再生频率和再生芽数;叶片基部的再生频率显著高于叶片中部和尖部,再生频率为68.1%。 4、山梨试管苗生根实验表明:1/2MS(大量元素)为最佳生根培养基,优于1/3MS和1/4MS;生长素IBA优于NAA,而以两者配合使用效果更好;培养基中添加2%的蔗糖优于3%的蔗糖。最佳生根诱导培养基为1/2MS+1.0mg/LIBA+0.5mg/LNAA+2%蔗糖。暗培养3天,生根率可达71.9% 5、采用农杆菌介导的转化方法将rolB基因转入到山梨的叶片中。在转化之前进行了叶片外植体对卡那霉素的敏感性试验,筛选出卡那霉素的筛选压为50～75mg/L。但因为种种原因,并没有获得转基因植株。