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茉莉酸类物质(jasmonates,JAs)是广泛存在于植物中的一类激素,在植物生长发育及防御反应中发挥作用,茉莉酸(iasmonicacid,JA)和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)是其代表性物质。近些年发现茉莉酸在拟南芥雄性生殖和番茄雌性生殖中是必需的。蓝猪耳是受精生物学研究的模式植物,其裸露的胚囊在花粉管配子体向性生长研究中具有独特的优势。本文以蓝猪耳为实验材料探讨茉莉酸类物质在蓝猪耳有性生殖中的作用。 利用微分干涉差(differential interference contrast,DIC)显微镜术和DAPI荧光染色相结合方法检测胚囊发育时期,确立蓝猪耳花冠颜色、柱头及花柱生长状态与胚囊发育时期的关系。通过与已发表研究结果比较,得出DAPI染色可以实现对蓝猪耳胚囊发育时期的确认,根据柱头的生长状态与花瓣颜色相结合可以更准确地判断胚囊的发育时期。 通过对蓝猪耳雌蕊各组分及不同发育时期各组分对半活体培养花粉管向性生长研究发现:柱头表现出轻微的吸引作用,花柱对花粉管的向性生长没有影响,子房特别是去除子房壁的子房能够明显影响花粉管的生长。根据实验结果得出,在蓝猪耳花粉管向性生长的孢子体生长阶段,花柱对花粉管生长主要起营养和支持作用,并不存在特异性的导向物,这一结果支持花粉管向性生长的机械性理论。 JAs对蓝猪耳花粉萌发及生长的影响研究发现,高浓度JA抑制花粉管生长(100μmol/L),低浓度JA(0.1μmol/L)促进花粉管生长;0.5和5μmol/LMeJA显著促进蓝猪耳花粉萌发,各处理浓度的MeJA对花粉管生长均有促进作用。在半活体培养系统中,外源JAs对花粉管生长的影响不大,但JA合成抑制剂IB(Ibuprofen)和DIECA(diethyldithiocarbamicacid)能不同程度地抑制半活体培养花粉管的生长并且抑制程度与抑制剂浓度成负相关,这提示花柱内花粉管生长需要JAs,JAs在体内花粉管生长中起一定作用。 利用ELISA法检测蓝猪耳植株及生殖器官中内源MeJA的含量及免疫荧光法检测JAs在柱头和花柱中的定位,以及半定量RT-PCR法测定JA合成关键酶基因AOC的表达发现:AOC基因的表达和内源MeJA的含量基本一致,MeJA的高含量往往伴随着AOC基因的高表达。在蓝猪耳各器官中,MeJA在叶中的含量最高,根中含量最低,茎和花中含量相差不大。花药中MeJA含量高于各发育时期的雌蕊。在胚囊发育过程中雌蕊中MeJA的含量变化不大,在授粉后5h柱头和子房中的含量明显增加。MeJA的含量在开花前七细胞期达到最高值,开花后降低。免疫荧光定位表明,JAs主要分布在蓝猪耳柱头乳突细胞,花柱的薄壁组织细胞和表皮细胞中。对JAs的定量测定和定位实验结果提示JAs在蓝猪耳花药发育、开花及授粉过程中起作用。