研究背景及目的糖尿病肾病（DN）也称为糖尿病（DM）性肾小球硬化症,是DM中最常见的慢性微血管并发症之一。DN在临床上的主要表现为肾小球滤过屏障受损并伴随着进行性蛋白尿的产生,弥漫性肾脏损伤及功能衰竭,当病情严重时则会引起终末期糖尿病肾病（ESRD）的出现。ESRD的发生不仅严重地威胁患者的健康还扰乱了患者的正常生活。黄葵又称为黄蜀葵花,早在几十年前已发现,黄葵的主要成分金丝桃苷可改善早期慢性肾病患者及小鼠等动物模型中出现的蛋白尿、肾功能障碍等症状。如今相关临床研究发现,一定剂量的黄葵胶囊（HK）治疗,可以降低早期DN患者及Ig A肾病患者的微量尿蛋白含量。尽管如此,HK治疗DN早期损伤的作用机制仍存在一些问题尚未解决。足细胞是肾小囊脏层的一种上皮细胞,也是肾小球滤过屏障的重要成员之一。其具有终末分化和高度特化性等特征,它的主要的功能是可以防止尿蛋白的流失。由于足细胞是滤过屏障的主要成员,当足细胞受到损伤时则会造成滤过屏障的结构和功能的破坏,最终导致功能性障碍,这也是DN患者中最常见的、重要的体现。由此说明:足细胞的损伤在DN的疾病进程中扮演着极为关键的角色。因此,在本研究中,我们以足细胞MPC5作为研究对象,以高糖浓度模拟DN环境,观察在不同剂量的HK处理下,高糖（HG）浓度中足细胞形态变化及损伤的情况。随后通过细胞实验,观察一定剂量的HK浓度对高糖浓度下足细胞周期、增殖及凋亡等生物学功能的影响。最后通过q RT-PCR结合western blot等实验检测HK的处理对高糖浓度下足细胞nephrin和podocin表达的影响,从而阐明其在DN中可能的保护机制,为中药有效成分的后续开发应用提供实验资料和参考,为今后的治疗决策提供坚实的理论基础。方法（1）高糖浓度的筛选及黄葵药物毒性检测高糖浓度筛选:将对数生长期的足细胞MPC5分为以下四组:空白对照正常糖（NG）,高糖1组（50mmol/L）,高糖2组（25mmol/L）,高糖3组（12.5mmol/L）,培养24-48小时后,观察细胞的生长状态从而挑选合适的高糖处理浓度。待高糖浓度确认好后,将高糖处理过的细胞放置在以下6种不同HK浓度（0g/L,0.3G/L,0.6g/L,0.9g/L,1.2g/L,1.5g/L）中处理24和48小时。最后根据MTT检测细胞毒性从而筛选最佳的药物处理浓度。（2）黄葵浸膏粉对高糖浓度下足细胞生物学功能的影响根据实验的目的将实验分成以下4组:5.6m M NG;5.6m M NG+0.45g/L HK;25m M HG;25m M HG+0.45g/L HK。利用MTT、流式细胞技术等检测HK的处理对高糖诱导下足细胞的增殖、凋亡及细胞周期的影响。（3）黄葵浸膏粉在高糖浓度下对足细胞的生物学作用首先,检测每个处理组中细胞凋亡水平,然后利用q RT-PCR和westernblot方法检测每个处理组中nephrin及podocin的表达水平。结果（1）通过高糖浓度的筛选和HK药物筛选实验结果发现:在25m M/L高糖浓度处理24h后的效果与DN环境最为相近,因此,以该高糖浓度和处理时间为最佳的处理农度和处理时间。此外,由于黄葵浸膏粉浓度为0.45g/L时对MPC5足细胞的毒性最小,故选用该浓度作为后续研究。（2）细胞增殖实验结果显示:与5.6m M/L NG相比,25m M/L HG高糖浓度处理的足细胞,形态发生变化,部分呈椭圆形,足突减少和融合;同时,高糖浓度可抑制足细胞增殖,促进细胞凋亡和导致细胞周期阻滞。随后对细胞凋亡进行检测发现:与25m M HG,25m M HG+0.45g/L HK处理组中的足细胞活力明显增加（P<0.05）,凋亡率下降;此外,在HK组的细胞周期中,G1期细胞比例极显著下降,S期及G2期细胞比例明显增加,且具有剂量依赖性（P<0.01）（3）q RT-PCR及western blot检测结果发现,相较对照组,高糖浓度显著抑制了Nephrin和podocin的表达（p<0.01）;然而,在高糖浓度处理条件下,适当浓度的HK处理可促进足细胞相关蛋白Nephrin和podocin的表达（p<0.05）结论:（1）适当剂量的HK可以加快高糖环境下足细胞的细胞周期,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,减轻足细胞损伤,从而对足细胞起着重要的保护作用。（2）长时间的高糖浓度处理可诱导足细胞凋亡,但一定浓度的HK可抑制高糖诱导的足细胞凋亡。其可能机制为:在高糖浓度下,HK可能通过调控足细胞相关蛋白Nephrin和podocin的表达,从而抑制足细胞的凋亡,由此对足细胞起着重要的保护作用。