本文以降烟碱细菌解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和边缘假单胞菌(Pseudomonas marginali)为出发菌株,使用原生质体融合技术将两种不同的菌株细胞融合,并将其应用到大田降解烟叶中烟碱。还对融合子产生的烟碱降解酶进行了初步分离纯化,主要的研究内容与结论如下：1以解淀粉芽孢杆菌T11和边缘假单胞菌作为亲本菌株,使用溶菌酶破除亲株细胞壁后以40%PEG-6000诱导解淀粉芽孢杆菌T11原生质体和已热力灭活的边缘假单胞菌原生质体进行融合,并检测了融合子的降烟碱能力。对融合子利用青霉素抗性初筛获得了176株再生融合子,利用烟碱降解率为指标进行降烟碱复筛实验后获得5株烟碱降解能力较高的融合子。根据融合子遗传稳定性分析及与亲本菌株烟碱降解效率的对比,获得了一株烟碱降解率比亲本菌株更强的融合子A2。获得的高效降解融合子A2在第5天后培养基中烟碱降解率基本稳定在93%。2分离纯化得到一个分子质量约为35 kDa的烟碱降解酶组分,该烟碱降解酶的最适pH为6.5-7.0,最适作用温度为35℃。通过双向电泳、质谱鉴定及部分烟碱中间代谢物的检测,融合子的降解烟碱的途径为吡啶途径。3使用解淀粉芽孢杆菌T11、边缘假单胞菌及融合子菌液喷洒烟叶后,其中间隔共处理3次后,解淀粉芽孢杆菌处理的烟叶烟碱含量由最初的4.2%下降到了3.45%,降解率为17.7%,而边缘假单胞菌及融合子的分别为18.57%、25%。GFP示踪试验中,喷洒菌液后,随着时间的推移菌株会慢慢的消亡。