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沙棘(Hippophae rhamnoides L.)为我国藏、蒙、维等少数民族的传统习用药材。近年来,随着沙棘开发的不断深入,国内外对沙棘的需求量日益剧增,野生沙棘的采摘量不断扩大,野生资源遭到了严重威胁。因此,亟需摸清沙棘资源的分布状况,掌握影响沙棘分布、产量、质量的诸类因子以及它们之间的相关性,适宜的引种栽培,这是提高沙棘质量的根本保证。 沙棘为典型的多基原药材,品种繁多,严重制约其质量控制及品质评价。随着现代分析技术的高速发展,指纹图谱技术已广泛用于中药材质量控制与评价,特别是1H-NMR分析技术,它可以同时检测药材提取物的初生和次生代谢产物,是整体性研究必不可少的方法之一。 本文将1H-NMR代谢组学技术用于鉴别沙棘品种,同时分析生态因子与其化学成分的相关性,旨在加强沙棘药材的质量控制及其品质评价。 目的: 1.了解青藏高原区域沙棘资源分布状况; 2.借助TCMGIS-Ⅱ系统,分析沙棘在中国的适宜生长区域; 3.运用1H-NMR代谢组学方法,研究不同基原沙棘药材代谢成分的差异,并结合数理统计学方法,分析生态因子与化学成分的相关性,为其品种鉴定以及质量控制提供科学依据。 方法: 1.结合标本查阅和文献研究结果,实地进行沙棘资源调查与样品采集,并记录经度、纬度及海拔等相关信息。 2.以中药材产地适宜性分析平台(TCMGIS-Ⅱ)为技术支持,对沙棘的生态适宜区进行分析。 3.采用1H-NMR代谢组学技术,同时检测分析3种不同基原沙棘(西藏沙棘H.tibetana Schlechtend.、中国沙棘H. rhamnoides L. subsp.sinensis Rousi.及江孜沙棘H. rhamnoides L. subsp. gyantsensis Rousi)的整体代谢成分,结合主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)方法研究3种基原沙棘之间的代谢成分差异。 4.运用双变量相关分析和逐步回归分析方法分析沙棘生境生态因子与其化学成分之间的相关性。 结果: 1.青藏高原东缘及其边缘区域总共分布有沙棘属植物7个品种及7个亚种,分别为:①鼠李沙棘H. rhamnoides L.(A中国沙棘H. rhamnoides L. subsp.sinensis Rousi.、B云南沙棘 H.rhamnoides subsp.yunnanensis Rousi、C卧龙沙棘H.rhamnoides subsp.wolongensis Lian K.Sun et X.L.Chen、D中亚沙棘H.rhamnoides subsp.turkeslanica Rousi、E蒙古沙棘H.rhamnoides L. subsp.mongolica Rousi)、②柳叶沙棘 H.salicifolia D.Don、③江孜沙棘 H. rhamnoides L. subsp. gyantsensis Rousi、④棱果沙棘H.goniocarpa Lian et al.ex Swenson et Bartish、⑤理塘沙棘H.litangensis Lian et X.L.Chen ex Swenson et Bartish、⑥肋果沙棘H.neurocarpa subsp. neurocarpa(A密毛肋果沙棘H.neurocarpa subsp.stellatopilosa Lian、B肋果沙棘H.neurocarpa subsp. neurocarpa)⑦西藏沙棘H.tibetana Schlechtend.。中国沙棘分布范围较广,资源蕴藏量最大。 2.经过TCMGIS-Ⅱ系统分析,沙棘生态相似度95%~100%适宜区主要分布于西藏、四川、山西等15省(市),总适宜面积为737994.71 km2;90%~95%的次适宜区面积达209890.96 km2。所覆盖的区域与资源调查和文献报道基本一致,但分析出了辽宁、重庆等部分文献尚未报道的适宜区。 3.从沙棘提取物中同时检测并鉴定出25个代谢成分:(1)黄酮及其苷类成分:槲皮素、山奈素、异鼠李素、黄酮苷类成分:槲皮素-3-O-β-D-芸香糖苷、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷;(2)五环三萜类成分:齐墩果酸;(3)氨基酸类成分:异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、奎宁酸、苹果酸、色氨酸、组氨酸;(4)糖类成分:蔗糖;(5)生物碱类成分:葫芦巴碱;(6)其他类成分:尿苷、L-白雀木醇、脱氢抗坏血酸、胆碱、饱和脂肪酸类、不饱和脂肪酸类、甾醇类。经过 PCA、PLS-DA分析,3种不同基原沙棘能够得到有效区分。 4.通过分析可知,影响沙棘药材中各代谢成分的主要生态因子为七月平均温、日照时数、经度、年降水量、活动积温。 结论: 1.沙棘野外种质资源调查结果表明,青藏高原东缘区域及其边缘地区总共分布有7个品种及7个亚种沙棘属植物,是中国野生沙棘属植物种质资源最为丰富的区域。 2. TCMGIS-Ⅱ系统分析结果在除了囊括沙棘原有主产区外,适宜区有了较大扩展,分析得到一些新的适宜区域,这些区域很有可能发展成为沙棘潜在的适生区,对沙棘资源的可持续利用、引种扩种和科学区划都具有重要的现实意义。 3.3种不同基原的沙棘药材代谢产物有明显差异,L-白雀木醇、糖类、奎宁酸、苹果酸和脂肪酸类成分是造成3个品种分类的差异代谢物。 4.初步筛选出影响沙棘药材品质的生态环境因子,为沙棘药材的品质评价提供了基础。