论文部分内容阅读
第一部分、二甲双胍拮抗大鼠焦虑样行为的机制 目的：前期实验表明，二甲双胍通过激活AMPK-FOXO3a-GABARAP信号通路，促进GABAA受体膜转运，并具有快速抗焦虑作用。那么，二甲双胍的抗焦虑作用是否与AMPK-FOXO3a-GABARAP信号通路激活有关呢？基于此，本部分实验主要是通过行为学探讨二甲双胍快速抗焦虑作用的机制。 方法：采用旷场实验及高架十字迷宫实验检测shRNA-AMPK和shRNA-FOXO3a对二甲双胍抗焦虑作用以及自发活动等的影响；采用western blotting检测海马CA1区shRNA-AMPK和shRNA-FOXO3a沉默效率；采用旷场实验和高架十字迷宫检测特异性干扰肽TAT-GABARAP本身对于基础焦虑水平的影响。 结果： （1）海马CA1区shRNA-AMPK阻断二甲双胍在旷场实验和高架十字迷宫实验中的抗焦虑作用。海马CA1区给予shRNA-AMPK后，二甲双胍不能增加大鼠进入中央区的时间，亦不能增加大鼠进入开放臂的时间。 （2）海马CA1区shRNA-FOXO3a阻断二甲双胍在旷场实验和高架十字迷宫实验中的抗焦虑作用。海马CA1区给予shRNA-FOXO3a抑制二甲双胍促进大鼠进入中央区的时间，以及进入开放臂的时间。 （3）TAT-GABARAP干扰肽不影响动物的自发活动能力和基础焦虑水平，表现为TAT-GABARAP干扰肽不影响大鼠在旷场实验中进入中央区的时间，也不影响大鼠高架十字迷宫实验中进入开放臂的时间。 （4）二甲双胍对焦虑样行为的改善作用均不影响自发活动。 结论：治疗II型糖尿病药物二甲双胍通过激活AMPK-FOXO3a-GABARAP信号通路而产生快速抗焦虑样行为的作用，为二甲双胍用于临床治疗焦虑症提供了实验依据。 第二部分、二甲双胍对大鼠线索型恐惧记忆消散的作用及机制 目的：研究报道证实基底外侧杏仁核BLA区促进GABAA受体的膜转运有利于调控恐惧记忆消散，而本实验前期研究发现二甲双胍促进海马神经元GABAA受体膜转运，那么二甲双胍对于线索依赖性条件恐惧记忆消散有何影响呢？目前尚未有报道。因此，本部分主要研究二甲双胍对线索依赖性条件恐惧记忆消散的作用及其机制。 方法：采用条件恐惧实验检测浓度梯度二甲双胍对恐惧记忆的作用；采用旷场实验检测二甲双胍对自发活动能力和焦虑样行为的影响；采用足底电击方式检测二甲双胍对痛阈的影响，采用强生血糖测试仪及试纸检测二甲双胍对正常血糖水平的影响；采用脑区局部给药结合条件恐惧实验考查TAT-GABARAP干扰肽对二甲双胍易化消散作用的影响。 结果： （1）腹腔注射100mg/kg剂量二甲双胍，显著降低经过短时间消散训练的SD大鼠的僵直率，易化恐惧记忆的消散，而50mg/kg和200mg/kg则对恐惧消散无影响； （2）二甲双胍易化消散的作用不影响影响动物自发活动能力，以及机体对伤害性反应的阈值，亦不改变正常的血糖水平， （3）BLA脑区给予TAT-GABARAP能够有效地阻断二甲双胍对恐惧记忆消散的易化作用。 结论：二甲双胍对经过短时间消散训练的SD大鼠恐惧记忆消散产生易化作用，该作用可能是通过激活GABARAP，增加GABAA受体膜转运而产生的。