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在核移植过程中，供核细胞与受体胞质是重构胚的两个重要构件，尤其是受体胞质对重构胚核基因的重新编程及胚胎的发育至关重要。目前，大多数研究者都是采用MII期卵母细胞作为受体胞质。但是该方法由于在去核时要抽取大量胞质，而且还要用紫外线照射以检查去核是否完全，因而对细胞损伤大影响重构胚的发育。近年来有人采用激活MII期卵母细胞待其排出第二极体后，抽取第二极体及其周围少量含核的胞质来达到去核的目的，又称为TII期去核。这种方法由于抽取的胞质少，而且不需要紫外线的照射，故而对细胞的损伤较小。
许多实验室对该方法进行了研究，但是关于卵母细胞TII期去核对猪体细胞核移植重构胚发育的影响，目前国内还尚无相关报道。本论文主要研究和比较了猪卵母细胞TII期去核方法与效果，在此基础上还对猪卵母细胞TII期去核法生产核移植胚胎的程序进行了优化，为推广应用该技术生产猪的体细胞核移植胚胎提供一些数据和经验。
本实验在原有猪体细胞核移植技术的基础上，对影响猪卵母细胞TII期去核重构胚发育的几个因素(卵母细胞预激活程序、核移植后核质作用时间以及核供体细胞预处理方法)进行如下实验。
1、猪卵母细胞TII期预激活物质的选择。本实验以第二极体排出比率为指标，分别选择不同浓度的三种物质，作用于猪成熟卵母细胞观察统计预激活效果。5％、7％和10％乙醇浓度预激活猪卵母细胞排出第二极体的比率分别为20.83％(25/120)、25.00％(30/120)和22.50％(27/120)；采用浓度为μg/mL、6μg/mL、8μg/mL，和10μg/mL的放线菌酮预激活猪卵母细胞后，第二极体的排出率分别为：16.67％(20/120)、19.17％(23/120)、25.83％(31/120)和20.83％(25/120)；浓度为5μmol/mL、10μmol/mL、15μmol/mL和20μmol/mL钙离子载体A23187(CaA)预激活猪卵母细胞后第二极体的排出效果为54.17％(65/120)、58.33％(70/120)、64.17％(77/120)和57.50％(69/120)，15μmol/mL，组效果最好，各浓度之间差异不显著(p>0.05)。比较以上三种物质预激活猪卵母细胞的效果发现15μmol/mL的CaA极显著优于其他两种物质(p<0.01)。
2、不同受体卵母细胞胞质对猪体细胞核移植的影响。本实验以重构胚卵裂率和4-细胞以上胚胎发育率为检测统计指标，以MII期中期去核和TII期去核的卵母细胞作为受体胞质，经血清饥饿的卵丘细胞作为核供体构建重构胚胎，比较两种受体胞质对猪体细胞核移植效果的影响。结果表明：MII期中期去核的卵母细胞为核受体胞质的卵裂率和4-细胞以上胚胎发育率均高于TII期去核的卵母细胞(31.67％vs24.17％，14.17％vs10.83％)，差异显著(p<0.05)。说明，MII期中期去核的卵母细胞更适宜作为核移植受体胞质。 3、不同核质作用时间对猪体细胞核移植的影响。采用电融合法将卵丘细胞移入去核的卵母细胞中，供体细胞在TII期去核的受体胞质内分别孵育0h、1h、2h、3h、4h和5h后，1.3kV/cm、80μs、单次脉冲电激活重构胚，以重构胚卵裂率和4．细胞以上胚胎发育率为检测统计指标，比较不同核质孵育时间对核移植效果的影响。结果表明：核质孵育4h可以获得较好的核移植效果，其卵裂率(35.83％(45/120))显著高于其他几组(22.50％、25.83％、26.67％、28.83％、30.83％，p<0.05)。4-细胞以上胚胎发育率与孵育3h组差异不显著(12.50％vs12.50％,p>0.05)。但与其它几组相比差异显著(12.50％vs 4.17％，9.17％，10.00％，7.50％,p<0.05)。说明用TII期去核卵母细胞作为核受体胞质，核质孵育4h后再进行补充性电激活可以提高猪体细胞核移植重构胚的发育率。
4、不同供核细胞预处理方法对核移植效果的影响。本实验将经过血清饥饿处理的卵丘细胞作为对照组，分别用7％乙醇和钙离子载体A23187(5μmol/L)预处理供核细胞，核移植重构胚融合后，核质孵育4h再激活，比较两种预处理方法对核移植重构胚的影响。结果表明：用CaA预处理组的核移植重构胚的卵裂率(37.50％vs30.83％)和4-细胞以上胚胎发育率(15.83％vs10.83％)均高于对照组，差异显著(p<0.05)。卵裂率也略高于乙醇预处理组的核移植重构胚卵裂率(37.50％vs34.16％，p>0.05)，但是4-细胞以上胚胎发育率显著高于乙醇预处理组(15.83％vs9.17％，p<0.05)。由此可见，TII期去核的卵母细胞作为核受体胞质，用钙离子载体预处理核供体细胞，核质孵育4h再激活重构胚，有利于核移植重构胚的发育。
综上所述，在以TII期去核的猪卵母细胞作为核受体胞质时，最适宜的程序是：用浓度为15μmol/mL钙离子载体处理卵母细胞5min，然后抽取第二极体及其周围少量胞质进行去核。供核细胞用5μmol/mL钙离子载体预处理后注入TII期去核的猪卵母细胞卵周隙内，采用参数为1.0kV/cm、80μs、单次脉冲电融合法移入供体细胞核，构建重构胚胎，此后，核质孵育4h，最后使用参数为1.3kV/cm、80μs、单次脉冲电激活重构胚，可以明显提高核移植重构胚的发育比率。简化核移植的操作程序。