星毛冠盖藤药用成分粗提取及其萃提物的体外抗癌活性初步研究

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目的:对星毛冠盖藤(Pileostegia tomentella Hand.-Mazz.)进行药用成分粗提取并初步研究星毛冠盖藤萃提物的体外抗癌活性。方法:(1)选择超声功率、液料比、乙醇体积分数、超声处理时间、浸泡时间作为考察因素,以总黄酮含量为评价指标,运用分光光度法,经由单因素试验、正交试验优选星毛冠盖藤中总黄酮的提取工艺。此外,还分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取星毛冠盖藤的乙醇超声提取物。(2)采用MTT法,检测星毛冠盖藤石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇及水层萃提物5种成分对人宫颈癌SiHa细胞和人肝癌Hep G2细胞的体外增殖的影响,并在倒置显微镜下观察癌细胞经药物作用后的形态学改变。采用Annexin V-FITC/PI双染法检测Hep G2细胞经星毛冠盖藤萃提物作用后的凋亡情况。结果:(1)在40℃水浴,超声功率100 W,正交试验表明最佳提取星毛冠盖藤总黄酮工艺为20倍量65%乙醇,室温下浸泡3h,超声提取50 mmin。还制备了星毛冠盖藤的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇及水层萃提物5种粗分离成分。(2)星毛冠盖藤的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水层萃提物对两种癌细胞均有剂量依赖性的增殖抑制作用,并且对Hep G2癌细胞的增殖抑制作用呈时间依赖性,但星毛冠盖藤的正丁醇萃提物对两种癌细胞的增殖均无影响。其中,星毛冠盖藤的氯仿萃提物对SiHa细胞的36 h作用IC50最低,为217.651±5.510μg/ml,星毛冠盖藤的石油醚萃提物对Hep G2细胞的72 h作用IC50最低,为541.308±29.223μg/ml。通过比较可知,SiHa细胞对星毛冠盖藤萃提物较Hep G2细胞敏感。同时,倒置相差显微镜下细胞形态的观察结果表明,上述星毛冠盖藤4种萃提物剂量依赖性抑制癌细胞生长增殖,正丁醇萃提物对癌细胞的生长增殖无明显作用,观测结果与MTT分析结论一致。星毛冠盖藤石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃提物作用24、48小时后Hep G2细胞凋亡率呈逐渐升高趋势。结论:(1)在40℃水浴,超声功率100 W,本实验所优选星毛冠盖藤中总黄酮提取工艺合理、有效、可以应用:20倍量65%乙醇,室温下浸泡3h,超声提取50 min。(2)星毛冠盖藤的石油醚、氯仿、乙酸乙酯及水层萃提物可不同程度地体外抑制人宫颈癌SiHa细胞及人肝癌Hep G2细胞的生长增殖,并能诱导Hep G2癌细胞的凋亡,具有很大的潜在抗癌活性。
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