Pti5是从番茄中克隆出来的抗病级联反应过程中的一个基因，其编码产物是调控病程相关蛋白（PRs）基因表达的转录因子，VP16来自Herpes simplex virus VP16蛋白的活化序列。将Pti5基因与VP16构成嵌合基因，可提高Pti5基因的表达。本文构建了Pti5-VP16基因的植物双元表达载体，然后用农杆菌介导法将其导入异源植物烟草中，目的是通过调节PR基因的转录来提高防卫基因的表达，从而提高转基因植株抗病性。 将Pti5-VP16基因亚克隆到pUC18上，构建了重组质粒pUCH1，对目的基因进行序列测定，并应用分子生物学软件DNASIS进行序列分析，表明Pti5-VP16基因全长为603bp，其中483bp与GeneBank中的Pti5基因完全一致，VP16片段为120bp，在Pti5与VP16之间有一个SalI酶切位点（GTCGAC），与提供的质粒图谱完全一致，并依据此序列设计出一对PCR引物。然后将Pti5-VP16基因构建到植物双元表达载体pBI121上，获得了含有CaMV35s启动子控制下的Pti5-VP16基因的植物双元表达载体pBI121UCH1，用冻融法将此重组质粒导入根癌农杆菌EHA105中。 通过根癌农杆菌叶盘转化法，用含pBI121UCH1质粒的农杆菌EHA105侵染烟草，经共培养，选择培养，生根培养获得了27株抗卡那霉素的烟草植株，并全部移栽成活。 提取抗性植株叶片的基因组DNA，用设计的引物对27株植株进行PCR检测，结果从所有的抗性植株中都扩增出大小500bp的目的片段。从凝胶上回收扩增的目的基因片段，用缺口平移法标记探针，选取3株PCR阳性植株进行Southern杂交，都有杂交信号。通过病原菌Pseudomonas．srying pv tabaci 叶片磨擦接种进行抗病性鉴定，结果转基因烟草对该病原菌的抗性明显增强。这些结果表明Pti5-VP16基因在所获得的转基因烟草中得到了表达，并通过对PR基因转录的调节来提高转基因烟草的抗病性。