实验一运用痰湿体质判定标准识别肥胖亚型与传统HOMA-IR法比较研究[目的]探讨运用痰湿体质判定标准进行肥胖代谢正常人群(MHO)识别及正常体重代谢性肥胖人群(MONW)筛选的可行性,从体质角度揭示肥胖亚型存在的内在机制,以期更加深刻的认识肥胖。[方法]1.选择肥胖人群,以常规肥胖亚型判定标准“稳态型胰岛素抵抗”(HOMA-IR,1.69nmol/L)和痰湿体质分类标准进行分类,检出MHO为阴性,未检出为阳性；检出痰湿体质为阳性,未检出为阴性,进行配对四个表卡方检验；2.选择痰湿非肥胖人群,及与之相匹配的平和质组(健康人)进行IR程度t检验；3.进行IR相关危险因素Logistic回归分析；4.进行痰湿体质相关危险因素Logistic回归分析[结果]1.结果显示两种检测方法构成比无显著差异,痰湿体质判定标准可有效识别出MHO人群；2.结果显示,即使IR未达到1.69的标准,但是明显高于平和质组；3.结果显示,最终进入IR影响因素回归方程的自变量为痰湿体质、腰围、家族遗传及是否饮酒,其余如体重指数、运动情况及饮食情况等影响相对较小；4.结果显示,依次移去饮酒、吸烟、体重指数、是否熬夜、运动情况等变量,最终进入痰湿体质影响因素回归方程的自变量为家族遗传史及饮食油腻。[结论]综合以上结果说明,痰湿体质判定标准对体重正常代谢性肥胖亚型有很好的识别作用,对肥胖代谢正常亚型(MNOW)识别具有良好的可靠性,且检出阳性率较HOMA-IR更高,敏感性更强,比传统方法更早一步。Logistic回归分析进一步说明,痰湿体质独立于肥胖及腰围之外影响IR程度,且痰湿体质并不完全受体重的影响,而先天禀赋与后天生活习惯不当均可能造成痰湿体质的形成。痰湿体质是肥胖亚型存在的内在因素,痰湿体质更是适合衡量代谢紊乱的倾向性。实验二痰湿体质易发代谢综合征的氧化应激机制研究[目的]基于实验一的结果,进一步从氧化应激角度探讨痰湿体质易发代谢综合征的分子机制,丰富痰湿体质体病相关的微观机制,并为从体质角度预防代谢综合征提供依据。为了排除并分析肥胖因素的作用,选择肥胖与非肥胖痰湿体质进行比较研究。[方法]1.以年龄、性别为基线,选择平和质组(PI)20人、痰湿非肥胖组(TF)25人(以BMI为基线)；肥胖非痰湿质组(FF)25人、肥胖痰湿质组(FT)30人(以BMI为基线)及代谢综合征组(MS)25人,共125人。进行一般资料及一般生化指标检测的卡方检验或方差分析；2.进行五组IR程度和FFA水平的比较；3.进行五组血清总抗氧化能力(T-AOC).抗氧化酶(SOD.GSH-Px. CAT)活性比较；4.观察血清氧化还原比(GSH/GSSG)的变化；5.进行NO含量及氧化酶NOS.iNOS活性比较；6.进行血清脂质氧化损伤产物MDA. ox-LDL.DNA氧化损伤产物8一OHdG含量的比较研究；7.分别进行如上各项指标与痰湿体质分值、IR的相关性检验。[结果]结果显示,1.除代谢综合征组年龄较其余组有显著增高外(P<0.05),其余所选对象基线一致。一般血糖、血脂、血压等指标除代谢综合征组外其余四组无显著差异；2.痰湿体质人群无论肥胖与否IR.FFA含量均显著增高(P<0.05)；3.结果显示,痰湿体质人群无论肥胖与否,抗氧化能力及抗氧化酶活性有代偿性增高倾向,唯独SOD下降.GSH-Px在痰湿非肥胖人群中表达不显著,肥胖痰湿与非痰湿差异不显著,但肥胖组较平和质组差异显著(P<0.05);4.GSH/GSSG比值依次在平和质组、肥胖非痰湿组、痰湿非肥胖组、肥胖痰湿组、代谢综合征组向氧化方向偏移；5.痰湿体质无论肥胖与否NO含量均降低,iNOS活性增高,但无统计学意义(P>0.05)；代谢综合征组iNOS活性增高,NO呈现较平和质明显的增高；6.在痰湿体质人群中脂质氧化损伤产物MDA、ox-LDL.8一OHDG表达有增高趋势,ox-LDL在痰湿非肥胖组较平和质组有显著升高(P<0.05),三个指标肥胖痰湿组均较平和质组显著增高(P<0.05),代谢综合征在此基础上表达更高；7.相关性检验结果显示：未病人群组痰湿体质分值和IR呈显著正相关(r=0.701,P=0.000),T-AOC. CAT.FFA.iNOS与痰湿体质分值、IR呈正相关,SOD.GSH-Px.GSH/GSSG. NO.MDA.OX-LDL.8-OHDG与痰湿体质分值、IR呈负相关。代谢综合征组痰湿体质分数与各项指标之间并没有显著相关性,但是各项指标都与IR呈现一定规律的相关性,T-AOC.CAT在此呈现出与IR呈负相关(r=-0.653,P=0.005),这与未病人群组相反；GSH/GSSG.SOD.GSH-Px与IR仍呈显著负相关；NO与IR呈正相关,与未病人群组相反。[结论]1.痰湿体质阶段机体总抗氧化能力T-AOC及CAT有不同程度的代偿增高,但是SOD活性明显下降,说明痰湿体质阶段氧化应激早期敏感指标为SOD,并可能与先天禀赋有关。而GSH-Px这一指标与肥胖因素关系更大。2.痰湿体质人群在未出现血糖、血脂及血压升高时即出现脂质氧化产物MDA. ox-LDL显著升高(内皮功能损伤的标志)、8-羟基脱氧鸟苷升高等氧化损伤现象。3.肥胖对痰湿内蕴的状态及氧化应激程度具有一定的促进作用,但没有必然的因果关系,甚至在某些指标表现上肥胖非痰湿人群低于痰湿非肥胖人群,与平和质人群水平相当。4.从平和质到痰湿体质到代谢综合征三个阶段除氧化应激程度逐渐增强外,抗氧化能力在未病与已病阶段呈现明显的转折,痰湿体质阶段抗氧化能力有代偿增高的趋势,但是在疾病阶段却呈现失代偿状态。呈现双向调节作用的NO在未病与已病状态也出现转折,即在未病状态下随着IR的增加NO降低,丧失了对内皮细胞和血管的保护能力,在疾病状态下NO反而随着IR的增加显著增加,超出正常生理范围,引起RNS自由基损伤。5.综上,在痰湿体质阶段即有氧化应激现象存在,但是抗氧化能力的代偿作用仍能够维持氧化还原的平衡,如若痰湿内蕴程度增加,继续向前发展,造成氧化还原失衡则会产生过多的自由基引起组织损伤,导致代谢综合征的发生。痰湿体质无论肥胖与否都表现出明显高于平和质组的代谢紊乱现象,“FFA含量增高引起氧化应激,并导致IR"可能是痰湿体质易发代谢紊乱的内在机制。偏颇体质未病阶段和已病阶段不仅仅是应激程度的积累,偏颇体质未病阶段虽然出现应激现象,但是仍然有代偿性的抵抗机制,而疾病阶段则明显的失代偿,这不仅仅是量的差异,是有质的区别,或许可为体质与证候之间的联系与区别提供借鉴实验三基于基因芯片技术的痰湿体质氧化应激相关基因及差异信号通路分析[目的]探索性的分析痰湿体质人群与氧化应激相关的差异表达基因及相关信号通路,以期为后续进行痰湿体质体病相关分子机制动物实验研究、药物干预研究提供基础。[方法]选择痰湿体质与平和体质人群(性别、年龄、体质指数、腰围无显著差异)各16例,分离外周血单个核细胞(PBMC),提取mRNA,利用人AffymetrixU33 plus 2.0全基因组表达谱芯片进行全基因组检测,选取与氧化应激相关的基因及差异信号通路进行分析。差异表达基因以P<0.05或(和)Fold change≥2或者≤0.5为标准。[结果]1.结果显示,痰湿体质组SOD对应基因SOD2表达下调,P=0.058,接近显著,与蛋白水平一致。GSH-PX及CAT对应基因GPX3.CAT表达下调,但无显著性。2.NF-κB信号通路：痰湿体质组NF-κB1表达上调,较对照组Fold change=1.16,P<0.01,差异有显著性。PKC信号通路：痰湿体质组PRKCβ表达上调,较对照组Fold change=1.23,P<0.01,差异有显著性。[结论]1.实验二结果提示,机体抗氧化能力受损可能与痰湿体质本身相关,SOD是其敏感指标,本结果显示痰湿体质人群SOD基因表达明显下调,进一步佐证了上述观点,由此提出SOD基因可能是痰湿体质先天遗传的敏感指标之一,而其余抗氧化酶指标敏感性不强；2.痰湿体质应激因子ox-LDL.NO等可能通过激活NF-KB信号通路来发挥作用,而NF-KB信号通路与胰岛素抵抗和胰岛素分泌受损密切相关,是代谢综合征经典通路之一,佐证了痰湿体质具有易发代谢综合征的结论。3.痰湿体质氧化应激因子可能激活PKC-PKD信号通路,PKC-PKD信号通路亦是与代谢综合征密切相关的信号通路,是参与糖尿病及高血压血管内皮功能异常的重要分子通路,也是药物干预的重要靶点,可为后续的痰湿体质干预研究提供一定的借鉴。