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目的：构建人抗菌肽FALL-39的原核表达系统，解决抗菌肽获取困难的难题；用PCR定点突变法构建人抗菌肽FALL-39基因突变体，并比较研究FALL-39及其突变肽的功能。方法：应用RT-PCR从人肺腺上皮细胞株SPC-A-1总RNA中扩增FALL-39成熟肽cDNA，以pGEX-1λT为载体，构建抗菌肽FALL-39基因大肠杆菌表达载体；采用一步法和两步法PCR体外定点突变技术，用赖氨酸替代第24位的谷氨酰胺和／或第32位的天门冬氨酸，构建FALL-39突变体大肠杆菌表达载体；该载体表达的融合蛋白经亲合层析、凝血酶酶切、胶回收和高效液相色谱分离纯化，获得高度纯化的重组FALL-39以及突变肽；对纯化产物进行的MEC、MIC、MBC和溶血性实验等比较抗菌作用以及对红细胞膜的溶解性，用RT-PCR测定人单核巨噬细胞株THP-1 iNOS的表达，研究FALL-39及其突变肽的抗内毒作用。结果：重组质粒pGEX-1λT-FALL-39测序结果说明其插入片段序列与GenBank登录的FALL-39基因的cDNA序列相符，且插入方向正确；DNA测序结果表明在预期位点发生突变，用一步法得到突变体质粒pGEX-1λT-FALL-39-Lys32，用两步法得到pGEX-1λT-FALL-39-Lys24以及pGEX-1λT-FALL-39-Lys24’32；重组原核表达质粒pGEX-1λT-FALL-39及其突变体融合蛋白有高效表达，经提取纯化可得到高纯度的活性蛋白FALL-39，FALL-39-Lys24，FALL-39-Lys32和 用PCR定点突变方法研究人抗菌肤FALL一39功能与结构的关系----一中文摘要FALL一39一切524’32(约4Kd)。突变后的FALL一39蛋白对大肠杆菌ATcc25922和耐氨节青霉素ML一35P的抗菌活性明显增强，最低抑菌浓度(Mle)和最低杀菌浓度(MBe)值FALL一39一切524，32最小，其次是FALL一39一Lys32和FALL一39一Lys24，均小于FALL一39。FALL一39一切532和FALL一39两种蛋白均在含MediumE的LB培养基中表现出较高活性，在LB培养基中抗菌活性最低，但在同一种培养基中FALL一39一Lys32蛋白抗菌活性要高于FALL一39蛋白。突变后FALL一39蛋白在抗菌剂量时对红细胞的溶解作用未见明显增加，较大剂量时对红细胞的溶解作用略有增加。突变后FALL一39一Lys32蛋白对LPS引起的iNOS mRNA的表达量增强抑制作用明显。结论:用FALL一39基因大肠杆菌表达载体可得到高效表达的蛋白;用高保真的Polybest DNA多聚酶进行一步法PCR定点突变技术简单、有效;突变质粒表达分子的抗菌活性和抗内毒素明显增强，对红细胞的溶解作用在抗菌剂量时未见明显增加，较大剂量时略有增加，提示在FALL一39分子中增加碱性氨基酸可以增强其抗菌活性。