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力达霉素（Lidamycin,LDM）是烯二炔类抗肿瘤抗生素,由本所独立开发,目前正在进行二期临床试验。以前的研究表明:LDM的作用方式独特,高浓度引起肿瘤细胞非caspase依赖的凋亡,而在较低浓度下,引起细胞具有衰老样表型的有丝分裂死亡。然而,肿瘤细胞对力达霉素不同反应的机制至今仍未阐明。本研究从细胞存活分子方面入手,利用不同的敏感和耐药细胞来探讨其作用机制。首先,Western blot、流式、SA-α-gal染色以及染色质凝集实验的结果表明:不同浓度的LDM引起人肝癌BEL-7402细胞出现2种特征的死亡方式。10nM LDM作用细胞24h后,出现典型的凋亡特征,p53蛋白的表达明显增高,出现PARP、SIRT1的切割片断以及亚G1峰。而0.5nM LDM作用细胞后,出现具有衰老样表型的有丝分裂性细胞死亡。细胞先被阻断在G2/M期,然后SA-β-gal染色阳性率明显增高（72h）,此时,p53蛋白的表达没有明显的变化,存活分子SIRT1也一直维持表达。此外,使用Western blot检测其他存活分子的表达变化。10nM LDM作用细胞后,不同时间收集细胞至24h,P38的磷酸化水平明显升高,FOXO3a和Bim的表达均于给药后下降,MnSOD与Cu/ZnSOD的表达未见增高。而在0.5nM LDM作用组中,FOXO3a和Bim的表达均于给药4h开始到72h逐渐增加,MnSOD与Cu/ZnSOD则于给药4～8h内一过性增高,Akt被明显激活的时间长至48h。这些研究表明:存活分子影响LDM的活性,导致出现不同的细胞死亡方式。使用染色质凝集和DNA凝胶电泳的方法,观察到1μM LDM作用1h可切割MCF-7细胞的DNA,但是却不能切割MCF-7耐多柔比星细胞的DNA。Western blot的结果表明这种现象与LDM迅速降低MCF-7细胞（而非MCF-7/DOX细胞）PARP和P53的含量有关,而与P糖蛋白、谷胱甘肽以及存活分子如SIRT1和Akt无关。同时,caspase抑制剂不能抑制LDM降低MCF-7细胞PARP和P53的作用。10nM LDM作用p53野生型（p53 wt）和p53敲除型（p53 ko）人结肠癌HCT116细胞24h,MTT结果表明p53 wt比p53 ko HCT116细胞对LDM更敏感。其机制与SIRT1和Akt有关。同时LDM诱导HCT116细胞出现衰老样表型、G2/M期阻滞、染色质快速凝集现象。LDM对人正常肝L-02细胞和肝癌BEL-7402细胞的MTT结果表明:LDM对L-02细胞的生长抑制作用要低于BEL-7402细胞。Western blot的结果表明在未经药物处理的BEL-7402细胞和L-02细胞中,PARP的表达未见明显差异;与L-02细胞相比,BEL-7402细胞的SIRT1和P53表达水平较高,而Akt的表达水平较低。本研究使用不同类型的细胞,初步证明存活分子影响LDM在肿瘤细胞内的活性而出现不同类型的死亡方式,有助于解释LDM的作用机制。