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子宫内膜炎是奶牛最为常见的繁殖障碍性疾病,严重威胁着全球奶牛养殖业的健康发展。目前对奶牛子宫内膜炎行之有效且常用的方法是抗生素和激素疗法,然而随着抗生素的大量应用,抗药菌株不断涌现,致使后期的感染更加难以治疗,而且抗生素和激素的使用不可避免会造成奶中药物残留,给人类的健康带来了危害。因此寻找毒副作用小且行之有效的药物来治疗奶牛子宫内膜炎,已成为现在研究的热点。中药具有资源丰富、毒副作用小且无残留的特点,因此许多国内外的专家学者将治疗奶牛子宫内膜炎的药物由抗生素转移到中药上来。近几年随着对小檗碱及其衍生物的深入研究发现小檗碱具有较强的抗炎作用。然而小檗碱对子宫内膜炎的作用效果和作用机制如何还未见报道。 奶牛作为实验动物具有耗资巨大、试验周期长、遗传背景不统一、饲养管理不方便等诸多缺点,然而,小鼠作为最常用的实验动物可以有效的避免上述缺点,且有大量的小鼠疾病模型被成功建立,因此我们选择小鼠作为炎症模型进行中药抗炎作用研究。 首先,本试验建立了小鼠子宫内膜炎模型。通过使用小鼠子宫灌注器(专利号:201410391820.8)向小鼠子宫内灌注不同浓度的脂多糖(LPS)并在灌注后的不同时间段取小鼠子宫进行组织切片制作和观察,MPO、NO的活性和浓度检测。结果发现在灌注LPS的浓度为2.5-5 mg/mL,灌注体积为20μL,且作用时间在24 h时,小鼠子宫组织中的MPO和NO较对照组极显著的升高且组织切片显示大量的炎性细胞浸润,结果显示小鼠子宫内膜炎模型建立成功。 随后本试验评估了小檗碱对LPS诱导的小鼠子宫内膜炎的作用效果。取60只小鼠随机分成6组:对照组、LPS+PBS组、LPS+小檗碱(2.5、5、10 mg/kg)组、LPS+地塞米松(5 mg/kg)组,分别在LPS灌注前1 h和灌注后12 h腹腔注射给药,灌注24 h后,取小鼠子宫进行组织切片观察,MPO活性测定,NO、TNF-α和IL-1β的浓度检测。结果显示,与LPS+PBS试验组相比,小檗碱可以显著地降低MPO活性和炎性细胞的浸润,抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和NO的表达。结果表明,小檗碱能够抑制LPS诱导的小鼠子宫内膜炎的发生。 为了探讨小檗碱抗炎的作用机制,本试验检测了NF-κB经典炎症信号通路中的关键蛋白P65和IκBα的磷酸化程度,结果发现,小檗碱可以显著地抑制小鼠子宫组织中P65和IκBα的磷酸化水平。结果表明,小檗碱可以抑制NF-κB信号通路的活化。 综合以上试验结果,本试验发现小檗碱可以通过抑制NF-κB信号通路的活化来降低炎性细胞因子的表达,抑制炎性细胞浸润来发挥抗炎作用。