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本研究以采自7个不同地区的牦牛粪便、肠道内容物为材料(样品共93个)用厌氧培养法进行乳酸菌的分离、纯化得到乳酸菌71株。通过生化实验和6种不同温度、5种不同pH、2种不同NaCl(%)下的生长实验鉴定后得到短乳杆菌5株,嗜粪乳杆菌3株,肠乳杆菌8株,嗜酸乳杆菌8株,保加利亚乳杆菌3株,弯曲乳杆菌2株,发酵乳杆菌11株,干酪乳杆菌4株,乳酸乳杆菌6株,植物乳杆菌9株,嗜热链球菌3株,乳酸乳球菌2株,粪肠球菌3株,尿肠球菌2株,海氏肠球菌2株。共71株15种乳酸菌。其中乳酸杆菌59株,球菌12株。 从这15种菌中各取2株,培养36h后制成菌体悬液,用1mol/L的盐酸调节乳酸菌的菌悬液的pH值,分别为2.0,3.0,4.0并于37℃处理5h。取菌悬液,在平皿上菌落计数。结果表明:Q1、Q6、Q3、Q4、Q7、Q8、ZH1、70、69、59、23、54、N3、N4、10、Z5、1、3、19有较强的耐酸性。在pH为2存活率仍然大于10%;在pH为3存活率在40%左右;在pH为4时存活率都大于85%。将供试菌株接种于胆酸盐浓度分别为0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%的蛋白胨水培养基中,37℃培养36h,用分光光度计测定OD660值结果发现Q1、Q6、Q3、Q4、Q9、Q10、ZH1、70、69、59、N1、N5、N3、N4、10、Z5、1、3、19都可耐受0.60%的胆酸盐。用单层琼脂平板扩散法对乳酸菌培养液抑菌功能、乳酸菌代谢产物抑菌功能、乳酸菌代谢产物温度处理下的抑菌功能、乳酸菌代谢产物的酸碱处理后的抑菌功能、代谢产物的酶处理后的抑菌功能进行试验,结果表明:这些菌的培养液、代谢产物、代谢产物高温处理后、代谢产物的酸碱处理后、代谢产物的酶处理后、都具有一定的抑菌效果,抑菌圈在13mm-30mm之间,多数在20mm-27mm。 参考GenBank中的各种乳酸菌16SrDNA基因序列,并经过多次比较,用Premier软件设计1对扩增乳酸菌16SrDNA从371-838的上下游引物,对Q1、Q3、Q7、Q9、ZH1、59、23、N3、19、1,这10种菌16SrDNA的这段可变区进行扩增,均得到约470bp左右的产物。SSCP电泳发现这10种菌的这段可变区序列呈现10种不同的条带。 对实验效果较好的5种菌的16SrDNA这段可变区进行序列测定。测序结果经DNAStar分析表明这5株菌的同源性在87.3%-95.6%之间。且这5株菌与GeneBank各自的标准序列的同源性分别为:Q1为98.51%;Q7为98.94%;ZH1为98.3%;19为9894%;N3为98.73%。同源性都大于98%。结果表明:这5株菌分别为嗜热链