3β-羟基莪术醇衍生物抗单纯疱疹病毒体内药效研究和云南蜱样本宏基因组分析

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本文对3β--羟基莪术醇衍生物抗单纯疱疹病毒体内药效和云南蜱样本宏基因组进行了分析。本研究分为两个部分:   第一部分:3β-羟基莪术醇衍生物抗单纯疱疹病毒体内药效研究。3β-羟基莪术醇衍生物是对底物莪术醇进行微生物转化、分离纯化而得到的多种化合物。体外药效实验表明3β-羟基莪术醇衍生物C10和C13具有良好的抗单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的效果,本研究对C10和C13体内抗HSV-2的药效开展研究,为将其开发为抗病毒新药提供理论依据。本研究采用临床分离的对小鼠不致死的HSV-2毒株,人工感染雌鼠诱发小鼠阴道炎,动态观察小鼠体重变化、记录外阴病变程度、感染后第7天阴道组织病理切片观察和荧光定量PCR检测阴道和子宫组织病毒载量这四项作为药物抗病毒的综合评价指标,为抗HSV-2药效评价和疫苗研究提供了一个简易、稳定和实用的动物模型。基于HSV-2感染的阴道炎模型和药物评价体系,对3β-羟基莪术醇衍生物C10和C13体内抗HSV-2的药效进行研究。结果显示,仅C13灌胃6mg组在减轻体重下降,降低外阴病变程度及阴道内病毒载量(103.01 copies/μl)上均有效果,单因素方差分析显示与病毒感染组(103.94 copies/μl)有统计学差异(P<0.05),但抗病毒效果不如阿昔洛韦(100.20 copies/μl)。   第二部分:云南蜱样本宏基因组分析。蜱作为许多人畜共患病的自然宿主或中间宿主,用高通量测序方法对蜱样本进行宏基因组分析,对监测和预防人畜共患病的流行有重要意义。本研究对云南省西南部(孟连地区)2608份蜱样本进行高通量测序分析(罗氏454 GS FLX测序平台),共得到了64,590个Reads,总碱基数为15,002,723,拼接得到了186个重叠群(Contigs),重叠群的长度从105bp到7619bp。将高通量测序结果与NCBI上的nr数据库进行tBLASTx比对,再用宏基因组注释工具MEGAN软件将tBLASTx比对结果归到不同的类群,构建MEGAN分类树。结果显示,91%的序列为数据库无匹配的Reads,4%为细菌,2.5%为病毒,1.5%为真核生物,1%为没有被公共祖先算法进行分配的Reads。该批蜱样本病毒种类除噬菌体和未知的单链RNA病毒外,主要的动物病毒有圆环病毒科(Circoviridae)病毒和与克里米亚-刚果出血热(CCHFV)匹配的病毒。对这株与CCHFV匹配的病毒进行进一步的研究,通过高通量测序和普通PCR,得到了该病毒L和S开放阅读框(ORF)区域的全长序列,但只得到了M的一些小片段。根据L和S序列比较的结果,推测该病毒是布尼亚病毒科内罗毕病毒属的一种新病毒。目前正在开展进一步的培养分离研究工作。
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