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目的研究桑黄提取物(extracts from Phellinus igniarius,EPI)对三阴性乳腺癌裸鼠皮下移植瘤细胞MDA-MB-231凋亡的影响并探讨其作用机理。方法实验室无菌条件下,常规在DMEM培养基内培养MDA-MB-231细胞,将不同浓度(20、40、80、160、320μg/ml)的桑黄提取物作用于MDA-MB-231细胞48小时,利用CCK-8法检测不同浓度桑黄提取物对MDA-MB-231细胞的影响,Western Blot检测不同浓度桑黄提取物对MDA-MB-231细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,Caspase-3)、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)表达水平的影响。培养的MDA-MB-231细胞,制备浓度为1×107/ml的细胞悬液,取200μl细胞悬液接种于裸鼠右侧腹股沟皮下,建立三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤模型。待肿瘤生长后,随机选取5只裸鼠,HE染色验证瘤体组织,并行免疫组化可见三种常见标志物,即雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)、孕激素受体(Progesterone Receptor,PR)及人类表皮生长因子受体2(Human Epidermal Growth Factor Receptor 2,HER2)表达均缺乏,证明此模型为三阴乳腺癌。选取模型制作成功后的30只裸鼠进行后续实验,随机将实验裸鼠分为5组,每组6只:对照组(腹腔注射0.9%的氯化钠水溶液0.2ml,1次/天)、EPI低剂量组(腹腔注射桑黄提取物30mg/kg,1次/天)、EPI中剂量组(腹腔注射桑黄提取物60mg/kg,1次/天)、EPI高剂量组(腹腔注射桑黄提取物100mg/kg,1次/天)、紫杉醇组(即阳性对照组,腹腔注射紫杉醇50mg/kg,1次/2天)。各组裸鼠在干预期间需常规记录相关实验数据,同时,每2天用游标卡尺测量瘤体最小径及最大径。本实验治疗时间跨度为3周,3周后采用脱颈法处死各组裸鼠,实验台上快速切取各组裸鼠的肿瘤组织,观察桑黄提取物对移植瘤生长的影响,并计算各组裸鼠移植瘤平均质量及肿瘤抑制率;HE染色后,镜下观察肿瘤组织切片的微观改变;采用TUNEL法检测瘤体组织内的肿瘤细胞的凋亡情况;通过免疫组化染色比较各组肿瘤内细胞增殖相关核抗原(Ki-67)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达来评估桑黄提取物对裸鼠移植瘤细胞凋亡的影响。结果CCK-8法检测不同浓度桑黄提取物对MDA-MB-231细胞的影响,结果显示:与对照组相比,各浓度组细胞的增殖率均降低,细胞受抑制情况呈浓度依赖性,其中浓度为160、320μg/ml的桑黄提取物组改变最为显著。Western Blot实验结果显示:浓度为160、320μg/ml的桑黄提取物处理的三阴乳腺癌细胞,其凋亡蛋白Caspase-3的表达水平明显高于20、40、80μg/ml浓度组及对照组,而其他浓度的桑黄提取物处理的三阴乳腺癌细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达水平无显著差别;与对照组相比,各组浓度组细胞中VEGF表达均降低,其中浓度为160、320μg/ml的桑黄提取物组改变最为显著。将MDA-MB-231细胞接种在裸鼠皮下约2天后,细胞吸收完全。在接种4天后可见小米粒样结节。此后皮下结节逐渐增大,且部分边界呈不规则样改变。接种4周后,裸鼠达到成瘤标准,瘤体最大直径大于等于0.5厘米。除对照组外,给予其余各组裸鼠为期3周的相应治疗。给药结束后,测量并计算移植瘤平均质量及肿瘤抑制率,桑黄提取物中、高剂量组(60、100mg/kg)及紫杉醇组瘤体的平均质量明显小于对照组和低剂量组(30mg/kg),差异均具有统计学意义。对各组肿瘤组织进行HE染色、TUNEL染色和免疫组化染色的实验结果显示:桑黄提取物中、高剂量组(60、100mg/kg)及紫杉醇组相比对照组、桑黄提取物低剂量组(30mg/kg)在相关实验中均有显著差别。结论桑黄提取物能够抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖,在浓度为20、40、80、160及320μg/ml范围,随着浓度增加,对细胞的抑制作用增强;桑黄提取物能够诱导三阴性乳腺癌移植瘤细胞发生凋亡,其作用机制是通过上调三阴性乳腺癌细胞中促凋亡蛋白Caspase-3的表达,同时下调血管内皮生长因子VEGF,以及肿瘤细胞增殖相关核抗原Ki-67的表达而诱导细胞的凋亡。图12幅;表1个;参93篇。