Delta阿片受体(DOR1)和Mu阿片受体(MOR)在疼痛神经传导通路中的相互作用参与了吗啡镇痛和耐受的过程。以往的研究表明,DOR1可以位于背根神经节(DRG)肽能小神经元中,且定位在大致密芯囊泡的结构上。然而,近来用基因敲入方法发现DOR1-GFP主要位于背根神经节大神经元中,且定位于细胞膜上,这对传统理论提出了挑战。因此,我们使用免疫组织化学和培养背根节神经元外源表达DOR1的方法重新审视了DOR1的分布和亚细胞定位。本研究发现针对不同受体序列抗原的DOR1抗体可以识别背根节中不同类型神经元中表达的DOR1,肽能小神经元中的DOR1定位于大致密性囊泡(LDCV)中,大神经元中的DOR1主要定位在细胞膜上。在培养的背根节神经元中,外源表达受体N端或C端融合GFP的DOR1都显示出在神经元中显著的细胞膜定位,而外源表达受体N端融合Myc的DOR1(Myc-DOR1)在肽能小神经元中显示LDCV定位,在培养的速激肽前体分子(PPT)敲除小鼠DRG肽能神经元中Myc-DOR1表达在细胞膜上,Myc-DOR1在大细胞中主要分布在细胞膜上。此外,我们用免疫组织化学方法重新肯定了DOR1在DRG肽能小神经元中与MOR有很好的共定位关系。通过本文的研究,证实了DOR1存在于DRG的肽能小神经元,发现DOR1在DRG的不同细胞类型中呈现不同的亚细胞定位形式,其在肽能小神经元中LDCV的定位依赖于PPT的存在,融合不同的标签蛋白会显著影响DOR1的分选和定位。以上结果对于理解在吗啡镇痛和耐受过程中DOR1对MOR的调控机理具有重要意义。　　 LDCV是一类受调节可分泌神经肽类物质的囊泡,另一类受调节可分泌神经递质的囊泡是突触小泡,其蛋白构成已经通过蛋白组学的方法进行了较深入的研究。然而,目前对LDCV定位的蛋白还没有系统地研究。我们通过密度梯度离心的方法在大鼠脊髓背侧的组织中纯化了LDCV,结合液相色谱-质谱法和蛋白杂交方法,发现了298个在LDCV中定位的蛋白,包括DOR1在内的G蛋白偶联受体、G蛋白和其它信号分子、离子通道以及运输相关蛋白。免疫组织化学方法显示DOR1、β2肾上腺素受体、Gαi2和电压门控钙离子通道的α2δ1亚基定位在DRG小神经元中含P物质的LDCV上,而β1肾上腺素受体、Wnt的受体蛋白frizzled8和dishevelled1则定位在另一种不含P物质的LDCV上。包埋后免疫电镜显示DOR1和下游的信号分子Gαi2、Gβ1γ5以及PLCβ2共定位在LDCV中,生化实验提示它们之间存在相互作用,在外界刺激的条件下该受体信号分子复合体可以一起插入到细胞膜上,用多肽打断DOR1和Gαi2之间的相互作用可以减少LDCV中定位Gαi2的量,并减弱刺激依赖的插入到细胞膜上Gαi2的量。这些实验表明,LDCV可以运输多种受体、离子通道和信号分子,在LDCV上DOR1和下游的信号分子组成了一个信号复合体,有利于其插入到细胞膜,迅速改变细胞膜的性质。以上结果有利于对调节性分泌途径中囊泡特征的理解,揭示了受体及其下游信号分子偶联的新模式。