超声波法与酶水解法结合分离鹅血血球蛋白工艺的研究

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鹅血资源丰富,是宝贵的动物蛋白资源,鹅血的蛋白含量高达23%~28%,其中的血球蛋白,转铁蛋白,免疫球蛋白等都是具有生物活性功能的蛋白,血细胞的蛋白含量高达45%,主要由血红蛋白构成,含量占血细胞蛋白总量的90%以上,是血液中蛋白的主要聚集所在。然而,由于鹅血中的腥味和血红色素,限制了对鹅血资源的利用,深入研究十分匮乏,综合利用也因此受到限制。对家禽类动物血脱色除腥,要结合高效的细胞破碎法和脱色方法,在脱色的同时提高生产效果,减少蛋白损失率。目前国内外对动物血破碎溶血的方法有:酶溶法、化学渗透法、溶胀法、机械破碎法等,但这些方法有的成本高,有的存在化学试剂残留,有的耗时长、生产效率不高;脱色的方法主要有:氧化法、机械法、高分子化合物絮凝法、有机溶剂法,但有的脱色效果不理想,有的生产成本高,有的有机溶剂残留难以分离,不利于动物血的脱色。本文比较了细胞破碎的各种方法和脱色处理的各种方法,综合分析,选择超声波细胞破碎法与蛋白酶水解法相结合的方式对鹅血蛋白进行脱色的工艺。相比之下,这两种方法的组合具有溶血高效彻底、蛋白得率高、脱色效果好、成本低、副反应少、无化学残留、易于工业化大规模生产、产品利于吸收等特点.主要研究结论如下:1.脱色加工工艺流程为:新鲜抗凝鹅血→离心→沉淀→细胞破碎溶血→酶水解→调节pH沉淀血红素→离心→上层清液→活性炭吸附脱色→离心→水解蛋白液。2.确定了鹅血血细胞超声波破碎溶血的工艺:在温度50℃下,将离心的新鲜鹅血细胞按溶剂比V_红细胞∶V_生理盐水=5∶1加入生理盐水后在超声波功率250W下处理15min。3.鹅血蛋白酶解的条件为:溶血结束后,将破碎后的溶血液中加入去离子水,调节底物浓度为40%,在温度55℃下。调整溶液pH8.0,加入木瓜蛋白酶进行酶解,酶比底物浓度[E]/[S]=8000u/g,酶解3h,反应过程中通过滴加5mol/L的NaOH和HCI溶液来维持pH值恒定.4.脱色工艺的确定:酶解结束后,立即用5mol/L HCI溶液调节水解液pH值4.5,抑制酶活性终止反应,在55℃下静置50min沉淀血红素。然后在7000rpm离心10min,弃去沉淀,将上层清液在温度.54℃、pH4.0下,加入2.5%活性炭静置脱色吸附65min。脱色结束后在7000rpm下离心10min除去下层活性炭沉淀,取上层蛋白质水解液,为最终所得的脱色蛋白液。
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