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主要应用膜片钳技术的全细胞和单通道记录模式,研究了甜菜夜蛾(Laphygma exigua)幼虫中枢神经元的兴奋性机制,以及细胞膜电压门控离子通道的特性,并分析了三氟氯氰菊酯(Cyhalothrin,Cyh)对甜菜夜蛾神经元兴奋性的影响。
在电流钳位的条件下分析了甜菜夜蛾神经元的兴奋性。结果表明,在甜菜夜蛾幼虫的中枢神经系统里,至少存在两种兴奋性机制不同的神经细胞。多数神经元所发放的动作电位属于典型的钠峰(Sodium spike),其上升相依赖于钠电流且能被TTX完全阻断,动作电位的复极化主要由I<,A>,I<,K>和I<,K(Ca)>三种钾电流介导。但对于少数神经细胞,发放的动作电位是由于钙离子内流引起,在复极化相具有明显的平台期,用TTX阻断钠电流对其影响较小,阻断钙电流能使这种“钙峰”(Calcium spike)消失。
在外液中施加浓度为10<-7>、10<-6>和10<-5>mmol/L的三氟氯氰菊酯。结果表明,三个浓度的药物效果相似,但产生效果所需的时间依次缩短。三氟氯氰菊酯能降低动作电位的幅度,随着时间的延长(1min、5min、15min),从96.7 mV到68 mV再到65 mV。而动作电位的时程随着时间的延长而增加,零线宽度从0.6ms到3.7 ms再到1.7 ms。但对连放的频率的影响很小。这说明三氟氯氰菊酯能抑制甜菜夜蛾幼虫中枢神经元的兴奋性。三氟氯氰菊酯对放电幅度的抑制和时程的延长,可能是分别通过对钠电流和钾电流的抑制来实现的。
在全细胞电压钳下记录了两种神经元的膜电流。将细胞分别钳制在-70 mV,然后给予60 ms的去极化刺激,发放钠峰和钙峰的两种神经元的膜电流种类和大小明显不同,这是两种不同的神经元放电的离子基础。发放钠峰的细胞具有较大的内向钠电流(5-8 nA)和外向钾电流(12-18 nA),而内向钙电流多数为外向的钾电流所抵消。而对于发放钙峰的神经元,离子电流的种类和外形都不同于前面的细胞,当施加TTX阻断钠电流,并用TEA阻断I<,K>之后,除了I<,A>之外还有明显的内向钙电流(2-3 nA),并且这种钙电流存在着明显的“rundown”现象。在15 min之后几乎消失。
在细胞贴附模式下记录了大电导的钙激活钾通道(BK)的单通道电流。当膜电位为0 mV时,电流是外向的;当膜电位为-60 mV时,电流变为内向的。多数时候只有单个通道开放,但有时有两个甚至多个通道开放。