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第一部分慢性乙型肝炎患者宿主肝细胞中调控HBV复制基因的筛选。方法：入选慢性HBV感染患者83例,其中免疫耐受期22例、免疫清除期(HBeAg P日性慢性乙型肝炎)25例、免疫激活期(HBeAg阴性慢性乙型肝炎)25例、非活动免疫控制期11例,并入选6例健康受试者；慢性乙型肝炎诊断标准符合中华医学会感染病学分会及肝病学分会2005年制定的《慢性乙型肝炎防治指南》中的诊断标准。超声引导下经皮肝穿刺活检术获取肝组织,采用Affymetrix RNA芯片,分析不同临床阶段慢性HBV感染患者肝组织的基因表达谱；为了降低免疫因素的影响,我们主要观察免疫耐受期和免疫控制期的不同慢性HBV感染状态下肝组织基因表达差异。结果：与免疫耐受期患者比较,非活动免疫控制期患者肝组织有109个基因的表达存在显著统计学差异(p<0.01),其中54个基因的表达明显上调,55个基因的表达明显下调。结论：慢性HBV感染各临床阶段肝组织基因表达存在差异性。其中,非活动免疫控制期与免疫耐受期相比,有109个基因的表达存在显著差异。第二部分在不同肝癌细胞系体外模型中利用小RNA干扰技术沉默特异性基因的表达,用southern blot和ELISA验证差异基因沉默后对HBV复制的影响。方法：在稳定表达HBV的肝癌细胞系HepG2.2.15中,分别转染针对109个基因的特异性小干扰RNA后,用Southern blot检测胞内HBV复制中间体、CMIA法检测上清液中HBsAg及HBeAg抗原分泌的水平；同时将具有复制能力的HBV感染性克隆和siRNA瞬时共转染Huh7肝癌细胞系,同法观察这些基因在瞬转模型中对HBV复制的调控作用。结果：沉默部分差异基因的表达后,HepG2.2.15或Huh7瞬转模型中HBV的复制水平出现明显上调或下调。结论：稳定转染和瞬转HBV感染细胞模型证实前述差异表达基因可影响HBV复制,其中大部分宿主肝细胞基因与HBV复制的关系乃首次发现。第三部分进一步在体外验证前述研究发现的对HBV复制影响显著的4个代表性基因(FAM176A, HIGD1A, MARVELD3和TOMM34)对HBV复制的调控效应和可能机制。方法：分析慢性HBV患者肝组织内FAM176A, HIGD1A, MARVELD3和TOMM34的表达水平与患者血清中HBV DNA载量的相关性；在稳定表达HBV的肝癌细胞系HepG2.2.15中转染不同浓度梯度的小干扰RNA后,用Southern blot检测HBV复制中间体水平、CMIA法检测细胞培养上清HBsAg和HBeAg,用Western blot检测胞内核心抗原的水平和核衣壳形成的变化以了解是否在转录后水平影响HBV的复制。在Huh7细胞系中共转染FAM176A, HIGD1A, MARVELD3和TOMM34表达质粒和可复制的HBV克隆,同样应用上述方法检测过表达该基因后对HBV的复制以及病毒蛋白表达的影响。观察过表达质粒和HBV克隆共转染后对HBV复制影响的剂量依耐性。luciferase荧光素酶活性检测来观察4个基因和HBV的启动子的直接相互作用。结果：FAM176A, HIGD1A和TOMM34的肝内表达水平与病人血清中HBV DNA水平呈负相关,而MARVELD3的肝内表达与患者血清中HBV DNA水平呈正相关。在HepG2.2.15细胞系中转染针对FAM176A, HIGD1A, MARVELD3和TOMM34的特异性siRNA可以促进HBV的复制和抗原HB-sAg及HBeAg的表达；而在Huh7瞬转模型中过表达这些基因可明显抑制HBV复制,并呈明显的剂量依赖性；沉默MARVELD3的表达能促进HBV核心启动子的活性,而过表达FAM176A能显著抑制HBV核心抗原水平和核衣壳的形成。结论：宿主肝细胞基因FAM176A, HIGD1A, MARVELD3和TOMM34可能具有调控HBV复制的功能,其中MARVELD3抑制HBV的复制可能与其对核心启动子直接作用有关。这些结果有助于加深对HBV复制调控分子机制的认识和新的基因治疗方案的开发。