根皮素对Hippo-YAP通路的作用及其对HepG2细胞生长的影响

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目的:验证根皮素是否通过作用Hippo-YAP通路来影响HepG2细胞的生长。方法:根皮素作用HepG2细胞后,运用RT-PCR技术、western blotting技术检测HepG2细胞中YAP mRNA和蛋白表达的变化;荧光素酶报告基因技术检测YAP对CTGF转录水平的影响。激光共聚焦检测YAP蛋白在细胞内的核质分布。细胞形态学观察、细胞转染实验、噻唑蓝(MTT)比色实验、集落形成实验和细胞侵袭实验检测根皮素对HepG2细胞生物学行为的影响。结果:根皮素作用HepG2细胞后,YAP在mRNA水平和蛋白水平均降低,其磷酸化水平升高,YAP下游蛋白CTGF、CYR61的表达降低;荧光素酶报告基因结果显示根皮素能够抑制YAP对CTGF转录活性;western blotting和激光共聚焦结果表明根皮素能够抑制YAP的核移位;观察细胞形态,发现根皮素能使HepG2细胞皱缩变小,变圆;MTT和集落形成实验结果显示根皮素能够明显抑制HepG2细胞的生长,其抑制作用与药物浓度呈正相关。若提升HepG2细胞中YAP表达水平,根皮素对HepG2的抑制能力显著降低;细胞侵袭实验显示,根皮素能够显著抑制HepG2细胞的侵袭。TAZ与TEAD是Hippo-YAP通路下游重要的基因,参与到肿瘤的形成过程,根皮素也能够抑制TAZ和TEAD mRNA和蛋白表达水平。结论:根皮素可以通过降低Hippo通路中YAP在mRNA、蛋白水平表达和转录活性,及抑制YAP的核移位来抑制HepG2细胞生长,促进其凋亡。
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