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免疫分析具有简单、快速、灵敏、低成本、高通量的特点,已在农药残留检测中广泛研究,异源竞争和非竞争模式是农药残留免疫分析的研究热点之一。噬菌体展示技术为快速建立异源竞争和非竞争免疫检测技术提供了途径。本文通过制备苯噻菌酯模拟表位噬菌体展示多肽和抗苯噻菌酯免疫复合体噬菌体展示多肽,建立了灵敏度更高、特异性更强的苯噻菌酯免疫分析方法。建立了苯噻菌酯高效液相色谱(HPLC)分析方法,采用C18反相色谱柱,检测波长为230 nm,以乙腈:水(65:35,v/v)为流动相,峰形对称、响应值高。在0.05-10.0 mg/L浓度范围内,苯噻菌酯标准溶液的峰面积与质量浓度呈良好的线性关系。在番茄和大米基质中的平均添加回收率为80.83%-100.46%,相对标准偏差为0.25%-5.54%,满足农药残留检测的要求。利用抗苯噻菌酯单克隆抗体,从环形八肽随机噬菌体展示文库(Ph.D.-C8C library)中淘选出20种不同氨基酸序列的苯噻菌酯模拟表位噬菌体展示多肽和3种抗苯噻菌酯免疫复合体噬菌体展示多肽。模拟表位多肽具有三种特征序列,分别为TPXGSL、GLAXFM和PXGAXH(X代表不同的氨基酸);抗免疫复合体多肽含有一种特征序列为PXIWPXXW为建立检测苯噻菌酯的竞争和非竞争噬菌体酶联免疫分析方法提供了必要的核心试剂。利用淘选获得的苯噻菌酯模拟表位噬菌体展示多肽,建立了苯噻菌酯竞争噬菌体ELISA方法。选择了最优的噬菌体C3-3,并对包被抗体浓度、噬菌体投入量以及缓冲液等条件进行了优化。在最优条件下,竞争噬菌体ELISA的抑制中浓度(IC50)为0.94 μg/L,最低检测限(LOD,IC10)为 0.22 μg/L,线性范围为(IC10-IC90)为 0.22-3.94μg/L,灵敏度比传统ic-ELISA方法提高了 8倍。方法除与吡唑醚菌酯的交叉反应率为0.34%外,与其他结构类似物均无交叉反应。在番茄、梨、黄瓜和大米四种基质中的平均添加回收率为67.6%-119.6%,相对标准偏差为2.2%-12.8%,符合农药残留检测的要求。竞争噬菌体ELISA对真实样品的检测结果与HPLC的检测结果接近,两种方法对大米样品中苯噻菌酯残留量的检测结果的相关性方程为y=0.948x+0.437,相关系数为R2=0.981;番茄样品中的相关性方程为y= 1.109x+11.88,相关系数为R2=0.981。研究结果表明,基于噬菌体展示多肽模拟表位可建立高灵敏的异源竞争免疫分析方法,检测结果准确、可靠,可用于农产品中苯噻菌酯的检测。基于淘选获得的抗苯噻菌酯免疫复合体噬菌体展示多肽,建立了苯噻菌酯非竞争噬菌体ELISA方法.。选择最优的噬菌体N6-18,并对包被抗体浓度、噬菌体投入量以及缓冲液等条件进行了优化。在最优的工作浓度条件下,苯噻菌酯的饱和中浓度(SC50)为 2.27 μg/L,最低检测限(LOD,SC10)为 1.11 μg/L,线性范围为(SC10-SC90)1.11-4.62μg/L,灵敏度比传统ic-ELISA方法提高了 3倍,与其他结构类似化合物的交叉反应率均小于0.03%。在番茄、梨、黄瓜和大米四种基质中的平均添加回收率为70.43%-128.57%,相对标准偏差为1.79%-11.53%,符合农药残留检测的要求。非竞争噬菌体ELISA的检测结果与HPLC的检测结果相吻合,对大米样品检测结果的相关性方程为y=1.073x-9.558,相关系数为R2=0.996;对番茄样品检测结果的相关性方程为y= 0.962x-7.429,相关系数为R2= 0.997。研究结果表明,利用抗免疫复合体可建立苯噻菌酯非竞争免疫分析方法,该方法具有较高的特异性与敏感性,可以作为环境和农产品中苯噻菌酯的检测工具。