研究背景:肝癌是常见的恶性肿瘤,居全球肿瘤发病率的第6位,死亡率的第2位。在我国,肝癌的发病率和死亡率也是居高不下。其主要临床特点是起病隐匿,容易复发转移,预后很差,五年生存率仅为20%。因此,探讨肝癌的发病机制,以实现肝癌的早发现、早诊断、早治疗已经成为目前临床和基础研究的主要方向之一。既往研究发现,端粒结合蛋白在多种肿瘤中呈异常表达,且与端粒长度和及端粒酶的活性具有相关性。RAP1、TPP1、TRF2作为端粒结合蛋白中的重要分子,在多种肿瘤中均有研究,包括神经胶质瘤、口腔鳞癌、结肠癌以及非小细胞肺癌等。此外,端粒长度在多种肿瘤的发生发展中也起着至关重要的作用,但是端粒保护蛋白TPP1、TRF2、RAP1及端粒长度在肝癌的研究目前鲜见报道。因此,本研究拟探讨TPP1、TRF2、RAP1及端粒长度在肝癌中的临床意义,旨在更为深入地认识肝癌的发生机制和预后影响因素,以探寻其早期诊断和预后检测的新指标。研究目的:1.明确肝癌中的端粒保护蛋白TPP1、TRF2、RAP1蛋白水平及端粒长度,并分析端粒保护蛋白TPP1、TRF2、RAP1与端粒长度的相关性;2.探究端粒保护蛋白TPP1、TRF2、RAP1及端粒长度与肝癌患者临床病理特征间的关系;3.探讨端粒保护蛋白TPP1、TRF2、RAP1及端粒长度与肝癌患者预后的相关性。1.收集川北医学院附属医院肝胆外科2014年10月到2017年10月51例肝癌患者行手术治疗所取得的癌组织、癌旁组织及远端组织,提取蛋白质,应用Western Blot检测端粒保护蛋白TPP1、TRF2、RAP1的表达;提取DNA,应用实时定量PCR检测相对端粒长度;2.分析端粒保护蛋白TPP1、TRF2、RAP1与端粒长度的相关性;3.收集病人临床病理资料,分析TPP1、TRF2、RAP1以及端粒长度与临床病理特征的相关性;4.收集患者术后随访资料,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,并用Log-rank法进行检验,探讨TPP1、TRF2、RAP1以及端粒长度分别与肝癌患者预后的关系;5.采用单因素生存分析探讨肝癌患者预后的相关影响因素。采用多因素COX回归模型分析探索肝癌的独立预后影响因子。研究结果:1.Western blot检测在51对肝癌、癌旁和远端组织中TPP1、TRF2、RAP1的蛋白表达,其中TPP1、RAP1在癌组织的蛋白水平均高于癌旁和远端组织组织(P<0.05),而癌旁组织与远端组织未见明显差异。TRF2的蛋白表达水平无统计学差异(P>0.05)。2.Real time PCR检测肝癌、癌旁和远端组织中的端粒长度,肝癌组织中的端粒长度明显短于癌旁和远端组织(P<0.05)。而癌旁组织与远端组织未见明显差异(P>0.05)。3.分析端粒保护蛋白TPP1、TRF2、RAP1与端粒长度的相关性,TRF2与端粒长度呈负相关;TPP1、RAP1与端粒长度不具明显相关性。4.与临床病理资料分析发现,TPP1与年龄呈负相关,与TNM分期研究方法:呈正相关;TRF2与TNM分期呈正相关;端粒长度与年龄呈负相关;RAP1与肝硬化病史呈正相关。5.Kaplan-Meier生存分析发现,TPP1高表达的肝癌患者的总生存时间和无瘤生存时间明显短于TPP1低表达的患者(P<0.05);TRF2高表达的肝癌患者的总生存时间和无瘤生存时间明显短于TRF2低表达的患者(P<0.05);而RAP1和端粒长度与肝癌患者预后无明显相关性。6.单因素Cox回归模型分析的结果显示,TPP1、TRF2的蛋白水平以及年龄、TNM分期与肝癌患者的无瘤生存时间和总的生存时间呈负相关。7.多因素Cox回归模型分析表明,TPP1、TRF2的蛋白水平是影响肝癌患者无瘤生存时间的独立预后不良因素;同时,TRF2蛋白水平也是影响肝癌患者总生存时间的独立预后不良因素。结论:1.端粒保护蛋白RAP1、TPP1的高表达,以及端粒长度的缩短可能参与了肝癌的发生,为肝癌发生的机制研究提供了新思路。2.TPP1、TRF2高表达肝癌患者的总生存时间和无瘤生存时间均明显短于低表达患者,且TPP1、TRF2均为肝癌患者的独立预后不良因素,提示TPP1、TRF2可能成为肝癌患者预后的有效监测指标。