该工作主要对IVM中培养前后的卵子及胚胎进行评分,并评估所采用的评分标准;通过对卵子周围的卵丘细胞凋亡状况进行检测,探讨卵丘细胞的凋亡程度与卵母细胞发育潜能的关系,以期根据卵子和胚胎形态学评分及卵丘细胞凋亡检测结果选择移植胚胎,提高体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization pre-embryo transfer,IVF-ET)的临床妊娠率.研究了光镜下形态良好与较差的卵母细胞的超微结构,并检测了其相应的卵丘细胞的凋亡率,总结了人卵母细胞充分成熟的超微结构特征及发育不良卵子的超微结构变化,为确定人卵母细胞体外成熟和体外受精最佳时期提供形态学资料,同时试图揭示人卵母细胞体外成熟过程中异常发育的形态学变化,希望能为卵母细胞发育调控机理方面的研究提供形态学资料.一、为了更好的指导临床工作,制定了"改良式人未成熟卵母细胞评分标准",对IVM中所取卵子进行培养前和培养后两次评分,同时记录卵子受精情况及胚胎发育情况,进行胚胎评分.统计资料表明,我们采用的卵子及胚胎评分标准具有可行性,即评分差的卵子发育潜能不良;评分好的卵子发育潜能良好,对临床具有指导意义.二、对卵丘细胞凋亡率进行检测,首次系统评价了卵丘细胞凋亡率与卵子发育潜能之间的关系.1.用H.E染色、DAPI染色和TUNEL检测对卵丘细胞的凋亡进行形态学研究,分辨正常卵丘细胞和凋亡卵丘细胞.统计卵丘细胞的凋亡率,并用SPSS分析软件进行统计学分析.分析结果表明,卵丘细胞凋亡率高的卵母细胞发育潜能差,卵丘细胞凋亡率低的卵母细胞发育潜能好,移植并妊娠的卵母细胞其卵丘细胞凋亡率最低.从卵丘细胞凋亡率的统计结果来看,用胚胎评分标准分类比用卵子评分标准分类更能反应卵母细胞的发育潜能.故结合形态学标准与卵丘细胞凋亡情况,选择可移植的胚胎,能够提高移植胚胎的妊娠率.2.按卵子评分标准将卵子分为两类:一类为优质卵子,另一类为不良卵子,分别提取其卵丘细胞的DNA,进行琼脂糖凝胶电泳.结果表明:优质卵子卵丘细胞凋亡程度轻,不良卵子的卵丘细胞其DNA在电泳时形成特征性的DNAladder图谱,进一步验证了形态学研究的结果.三、对人卵子超微结构进行研究,首次将卵丘细胞凋亡率与卵子超微结构及发育潜能联系起来.电镜实验结果及统计学分析表明:光镜下形态良好的卵母细胞其卵丘细胞的凋亡率与妊娠卵子的卵丘细胞的凋亡率无显著差异,其卵母细胞的超微结构能够反应卵母细胞充分成熟的特征.卵丘细胞凋亡率高的不良卵母细胞超微结构上的变化,反应了卵母细胞的凋亡迹象;而卵母细胞各部分发育的不同步也反应了卵母细胞不良的发育潜能.