一、目的： 通过观察地塞米松（Dexamethasone，DXM）对血管内栓线阻断法造成大脑中动脉闭塞（MCAO）的大鼠的梗死灶体积及缺血再灌后神经细胞凋亡的影响，进一步探讨大鼠脑缺血再灌后神经元凋亡的情况及地塞米松的作用机制。二、材料和方法 （一）材料：地塞米松磷酸钠（浙江新昌制药厂）；氯化三苯四氮唑（TTC，由上海化学试剂采购供应站采购）；苏木素液，伊红染色液，梯度浓度乙醇，二甲苯（浙二医院病理科提供）；原位细胞凋亡检测试剂盒（德国Roche公司） （二）动物分组及处理：选用雄性SD大鼠60只，月龄3月，体重250～295g（由浙江省医学科学院动物实验室提供），自由饮D 地塞米松对大鼠脑缺血再灌后神经元凋亡的影响·二·Dl 食，饮水，同等条件下饲养，均于术前 6 小时开始禁食。随机分 lD 成6纠：DD 第①、③织为假手术对照组（＊一6），假手术＊＊M组（＊一6）：Dl 前者大鼠于缺血前 3大腹腔注射生理盐水 0．sml，每天 1次，共 31l 次；后者大鼠于缺血前 3天腹腔注射 DXM．sing／kgJ，每大 1次，ll 共 3 次，两者均于制作动物模型时插入尼龙线的深度小于 smm，ll 不洁成大脑中动脉（MCAI缺血：ll 第③组为缺血对照组（n—12）：大鼠于缺血前 3 天腹腔注射 ll 生理盐水 0．5 ml，每大 1次，共 3次，然后制作右侧大脑中动脉缺 ll 血的动物模型；ll 第④⑤③组分别为缺血 DXM 大剂量组（n—12）、中剂量组 ll（n—12）、小剂量组（n—12）大鼠分别于缺血前 3 天腹腔注射 l DXM5mg／kg·d，1．sing／kg．d，0．sing／kgJ，每天1次，共3次，然l 后制作右侧大脑中动脉缺血的动物模型；ll（三）右侧大脑中动脉缺血再灌注的动物模型制作：SD大鼠l 用水合氯醛350mg／kg体重麻醉并固定；从颈部正中切开，切口约12cm，逐层分离至气管，分离右侧颈总动脉，穿3－0缝线备用；在ll 甲状腺上侧分离颈内及颈外动脉，在颈外动脉远心端穿两根 3－ofD 缝线，分别结扎后中间剪断，分离并电凝颈外动脉分支；暂时结DD 扎颈总动脉，将颈内动脉用动脉夹暂时夹闭；在颈外动脉剪一小Dl 切口，将 3－0 尼龙线从切日处插入，并将切口用缝线轻轻扎住ZII 地塞米松对大鼠脑缺血再灌后神经元凋亡的影响·3·I 松开颈内动脉的动脉夹，将尼龙线轻轻送入颈内动脉约 二cm，此9 时可遇到轻微阻力，发现大鼠右眼虹膜颜色变浅，将此时作为缺【血的起始时间；将尼龙线固定好，缝合皮肤；缺血40分钟后，将B 皮肤重新切开，尼龙线轻轻拔出，用缝线扎紧颈外动脉切口，然l 后将颈总动脉上的缝线取下，重新缝合皮肤；假手术对照组（OD 组）和假手术DXM组（②组）除将尼龙线送入颈内动脉内长度小D 干5＿外，其余步骤与上述相同。D（四）脑组织梗死体积测定：全部大鼠在拔出尼龙线后24小l 时分别断头取脑，将取出的鼠脑置于．20吐冰箱冷冻 10分钟，达l 到适当硬度；取出鼠脑，切除 Zmm长的前脑额极，根据标尺用刀l 锋在鼠脑表面正中线以 Zmm rd隔划定标记，再按此标记用刀片作］ 冠状切片，共获得 5广腼组织切片，母片约厚 ZmmZ 将脑片漱卞 2％TTC中，在 37、孵箱中孵育半小时，未受损的正常脑组织染 色后呈深红色，梗死组织不着色而呈白色；将染色后的脑组织浸d 泡在 10％的甲醛中，固定 30分钟；取出染色芥固定后的脑片，依 S 次排列成序，旁边放一有刻度的标尺，用数码照相机分别拍摄脑 片的正反面，然后将所摄得的照片输入计算机。脑片的白色区域 代表梗死区，红色区域代表未梗死区，用计算机软件根据脑片上 红色和白色的界限分别计算：每个脑片正面和反面的右半球非梗 死灶面积（RN）、左半球总面积（LT），算得右半球梗死面积（RI） 一LT－RN，算得的正面和反面的面积相加除以2得一平均值，乘上l 地塞米松对大鼠脑缺血再灌后神经元凋亡的影响·4·l