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目的:趋化因子是一类小分子量蛋白,可由多种细胞产生,以激活和趋化免疫细胞为主要功能参与到人体内的炎症反应过程以及肿瘤的进展过程中。按照N-端半胱氨酸位置及数目的不同分类为CC、CXC、CX3C、C(C代表半胱氨酸,X代表任意氨基酸)。CXCL8作为CXC类趋化因子超家族的一员,是最早被发现的具有趋化作用的细胞因子,能与其受体CXCR1、CXCR2特异性结合,在乳腺癌肿瘤的形成、侵袭、血管新生以及转移中起到至关重要的作用。iP10是CXCR1/2的拮抗剂,可与CXCL8竞争受体CXCR1和CXCR2,有效地干扰了CXCL8参与的炎症、肿瘤相关的反应过程。本研究在乳腺癌小鼠模型中联合应用了CXCR1/2拮抗剂iP10和顺铂,研究iP10对顺铂抗肿瘤作用的增强效果以及对化疗不良反应减轻作用,为乳腺癌的治疗提供新的方法。方法:1.体内实验:小鼠模型建立:将对数生长期4T1细胞配成为浓度3×105个/ml的细胞悬液,接种于雌性Bal B/C小鼠腹部两处乳垫处。在接种肿瘤细胞后第7日可在皮下触及肿瘤形成,随机将小鼠分成4组:肿瘤对照组、iP10组、顺铂组和联合用药组,每组包含8只小鼠。顺铂组和联合用药组小鼠给予顺铂12.5mg/kg腹腔单次注射,其余组小鼠同时给予注射等量生理盐水。iP10组和联合用药组隔日背部皮下注射500μg/kg的iP10,其他各组小鼠同时注射等量生理盐水。标本处理:于用药第21日,将全部小鼠处死,剥离并留取实体瘤。检测方法:(1)比较各组小鼠肿瘤体积。(2)监测各组小鼠体重变化。(3)记录并比较用药后各组小鼠死亡率。(4)免疫组化法检测EGFR炎性因子在肿瘤组织中的表达水平。(5)RT-q PCR检测各组肿瘤组织CXCL6、CXCL8、TNF-α炎性因子的表达水平。(6)Western Blotting法检测血管内皮生长因子VEGF、转录因子NF-κB在肿瘤组织中的表达水平。(7)检测肾组织MPO活力。2.体外实验:细胞培养:4T1肿瘤细胞体外培养,直至对数生长期,随机分为4组,分别给药处理。检测方法:(1)细胞划痕实验:检测iP10联合应用顺铂对肿瘤细胞迁移能力的影响。(2)软琼脂克隆形成实验:检测iP10联合应用顺铂对肿瘤细胞增殖能力的影响。结果:1.体内实验(1)对各组留取的肿瘤体积进行比较,结果显示,联合用药组295.90±52.57mm3(P<0.05)肿瘤平均体积小于iP10组526.14±72.54mm3(P<0.05)以及顺铂组457.65±89.96mm3(P<0.05),明显小于肿瘤对照组747.86±106.38mm3(P<0.05)。(2)比较各组小鼠体重变化情况,分析结果显示,除顺铂组小鼠从用药后第4日开始体重呈减轻趋势外,其余3组体重均增长,且3组间无明显差异,联合用药的毒性作用在可以耐受的范围内。(3)对各组小鼠用药治疗后死亡率进行比较,结果显示,除联合用药组未见小鼠死亡,生存率为100%,其余组均有小鼠死亡情况。顺铂组的小鼠生存率仅为70%,肿瘤对照组的小鼠生存率为90%,iP10组的小鼠生存率为90%。(4)免疫组化法检测各组小鼠肿瘤组织中表皮生长因子受体(EGFR)表达水平,结果显示与肿瘤对照组相比较,iP10组、顺铂组以及联合用药组肿瘤组织的EGFR表达均受到不同程度的抑制(P<0.05),其中联合用药组表达水平最低(P<0.05)。(5)RT-q PCR检测各组肿瘤组织炎性因子CXCL6、CXCL8、TNF-α的m RNA表达状况,结果显示,肿瘤对照组的CXCL6、CXCL8、TNF-α表达水平在各组中最高(P<0.05),iP10组、顺铂组和联合用药组三组的CXCL6(P<0.05)、CXCL8(P<0.05)、TNF-α(P<0.05)因子表达水平均明显低于肿瘤对照组,其中联合用药组表达水平最低(P<0.05)。(6)Western Blotting法检测结果显示,肿瘤对照组VEGF、NF-κB的表达水平在各组中最高(P<0.05),其余按表达水平高低依次为iP10组、顺铂组及联合用药组(P<0.05)。(7)检测肾组织MPO活力,结果显示,肿瘤对照组0.53±0.09,iP10组0.28±0.08,顺铂组0.72±0.13,联合用药组0.43±0.06。单独应用顺铂治疗组MPO含量在4组中最高,联合用药组与顺铂组比较MPO含量显著减低(P<0.05)。2.体外实验(1)细胞划痕实验结果显示,肿瘤对照组(0小时129.94±0.16 pixels,24小时35.98±0.13 pixels,48小时0 pixels,72小时0 pixels),iP10组(0小时130.02±0.08 pixels,24小时90.00±0.11 pixels,48小时0 pixels,72小时0 pixels),顺铂组(0小时149.99±0.10 pixels,24小时93.99±0.08 pixels,48小时51.99±0.15 pixels,72小时0 pixels),联合用药组(0小时140.00±0.11 pixels,24小时135.97±0.05 pixels,48小时130.00±0.01 pixels,72小时94.00±0.03pixels)。(2)软琼脂克隆形成实验所得结果为,肿瘤对照组克隆数2±2(P<0.05),iP10组克隆数16±3.47(P<0.05)、顺铂组克隆数8±3.22(P<0.05)和联合用药组克隆数7±2.32(P<0.05)形成的数目均明显减少(P<0.05),其中联合用药组肿瘤细胞克隆数目最少(P<0.05)。结论:1.iP10可增强顺铂抑制乳腺癌肿瘤生长的能力,且作用明显大于单独用药组。2.iP10可减轻顺铂治疗的毒副作用,与肿瘤对照组相比无显著增加药物毒性,药物不良反映在可以耐受的范围内。3.iP10可增强顺铂对乳腺癌肿瘤细胞迁移和增殖的抑制作用,联合用药能更有效地杀伤肿瘤细胞。