目的:探讨髓样分化蛋白-2模拟肽(MDMP)对巨噬细胞吞噬革兰氏阴性细菌的影响及所致炎症因子分泌的抑制效应。方法:利用PCR技术从PEGFP-C3质粒中扩增出表达EGFP的基因片段,通过基因重组方法构建原核表达载体pET-32a(+)-EGFP,经测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)PLysS中筛选出稳定表达的重组菌p ET-32a(+)-EGFP-BL21(DE3)PLysS(简称为EGFP-BL21)。以IPTG作为诱导剂诱导重组质粒表达后,通过免疫荧光技术和流式细胞术检测RAW264.7细胞对EGFP-BL21细菌的吞噬能力以验证EGFP-BL21的构建情况。进而以EGFP-BL21作为工具,进一步检测RAW264.7细胞及骨髓源巨噬细胞对经不同浓度的MDMP(1,10和100ug/ml)预处理后对EGFP-BL21的吞噬效应;并通过ELISA方法检测细胞培养上清液中TNF-α和IL-6的分泌水平。结果:筛选获得稳定表达EGFP的重组大肠杆菌BL21(DE3)PLys S,重组菌经巨噬细胞RAW264.7吞噬后流式和激光共聚焦检测结果显示细胞内出现明显的绿色荧光。MDMP预处理后,流式检测结果显示RAW264.7细胞及骨髓源巨噬细胞对EGFP-BL21的吞噬能力受到明显抑制,预处理组(10,100ug/ml)的吞噬系数(PI)显著低于经血清调理的阳性对照组(P<0.01),且细胞培养上清TNF-α和IL-6的分泌水平显著降低(P<0.01)。结论:稳定表达EGFP的重组大肠杆菌BL21(DE3)PLysS可用于研究巨噬细胞对革兰氏阴性细菌的吞噬效应。干预实验结果表明,MDMP预处理可明显抑制巨噬细胞对革兰氏阴性细菌的吞噬作用,并降低该过程中炎症因子TNF-α和IL-6的分泌。