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[背景／目的]乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎(HBV-GN)是乙型肝炎病毒感染最主要的肝外表现之一。然而HBV-GN的发病机制尚不明确,多数研究认为与免疫损伤有关。黑素瘤缺乏因子2(AIM2是最近研究发现的胞质双链DNA传感器,它能够识别胞质内的双链DNA并被激活,形成免疫复合物,通过Caspase-1途径,促进IL-1p与IL-18前体的成熟及分泌,诱导固有免疫反应,在机体抵御病毒、细菌感染中起重要作用。本研究旨在初步探讨AIM2的激活与表达在IHBV-GN发病机制中的作用。[方法]1.于ScienCell Research Laboratories (California,USA)购买人肾小球系膜细胞系(HMC),体外培养,观察细胞形态。2.将pcDNA3.0-1.1HBV质粒转化大肠杆菌感受态细胞DH5a,经抗性筛选、酶切分析、测序,鉴定质粒。3.设计合成针对人AIM2基因序列特征设计特异siRNA-(1#—3#),以阳离子脂质体为载体,转染体外培养的人肾小球系膜细胞；FAM荧光标记,测定转染率,观察转染后细胞形态。荧光定量PCR检测siRNA抑制AIM2mRNA水平上表达效果。进一步通过Western blot检测siRNA抑制AIM2蛋白水平表达效果。应用SPSS17.0软件分析AIM2在各组表达的差异,筛选出针对AIM2基因最有效的沉默片段。4.利用筛选出的针对AIM2基因的有效siRNA序列,干扰人肾小球系膜细胞。将HMC细胞分为AIM2siRNA2#及pcDNA3.0-1.1HBV共转染组,AIM2siRNA control及pcDNA3.0-1.1HBV共转染组,AIM2siRNA2#及pcDNA3.0共转染组,荧光定量PCR与western bolt分别检测各组caspase-1, IL-1β, IL-18的表达。应用SPSS17.0软件分析caspase-1、IL-1β,IL-18在各组表达的差异。评价AIM2基因沉默后对这个炎性网络中其他炎性因子的影响。[结果]1.人肾小球系膜细胞传代培养贴壁良好,显微镜下可见,HMC细胞均质、透明,胞体呈纤维状、梭形或长条形,细胞结构不明显,在生长时多呈放射状,火焰状等有规律的走行,符合成纤维细胞特征。2.pcDNA3.0-1.1HBV质粒转化后随即小量抽提质粒,BamHI酶切,1%琼脂糖凝胶电泳,证实目的基因定向插入成功。对pcDNA3.0-1.1HBV进行测定和同源性分析,证实序列正确。3.FAM荧光标记后测定转染率在70%以上,观察转染后细胞形态及生长均无明显影响。荧光定量PCR及Western blot结果显示AIM2siRNA2#相对基因抑制水平最强。4.荧光定量PCR结果显示与HBV组比较,阻断AIM2表达可使caspase-1, IL-1β, IL-18表达量分别下降2.9、3.8、2.8倍。与AIM2siRNA组比较,转染HBV可使caspase-1, IL-1β,IL-18表达量分别下降3.4、4.3、3.7倍,Western blot结果与荧光定量PCR结果一致。[结论]AIM2通过与HBV-DNA识别并激活,经Caspase-1途径激发固有免疫,释放IL-1β,IL-18等炎性因子,从而导致乙肝病毒相关性肾小球肾炎的肾脏损伤。