论文部分内容阅读
第一部分 阻断UPP对脑缺血大鼠NF-κB的作用机制研究 背景与目的 泛素-蛋白酶体通路(ubiquitin-proteasomepathway，UPP)是细胞内重要的非溶酶体蛋白降解途径，参与炎症反应等的调节。大量研究证明炎症反应是脑缺血再灌注损伤的重要病理生理机制。NF-κB转录调节多种炎症相关因子的表达而被认为是脑缺血后炎症反应中最重要的调控因子之一。可见转录活性是决定NF-κB功能的关键因素。UPP通过降解泛素化工κB而使NF-κB激活。用蛋白酶体抑制剂阻断UPP可抑制它的转录活性，从而调节NF-κB调控的炎症反应。在脑缺血模型中用蛋白酶体抑制剂阻断UPP是否可通过抑制NF-κB的转录活性而产生神经保护作用这方面的研究国内未见相关报道。因此我们设想在脑缺血模型中可通过阻断UPP，抑制NF-κB的转录活性，从而减轻脑缺血再灌注后的炎症反应。试图从炎症反应方面说明阻断UPP产生神经保护作用的机理，为临床治疗脑缺血提供理论基础和新方法。 方法 健康雄性SD大鼠132只随机分为5个组：正常组、假手术组、生理盐水对照组、缺血组和干预组。后2组根据再灌注时间又分为再灌注6h、12h、24h、和7d亚组。线栓法制作大脑中动脉缺血2h再灌注模型。干预组在缺血再灌注后立即静脉给予clasto-lactacystin β-lactone(0.03mg／kg)以阻断UPP。前3组在术后24h处死动物，后2组在相应时间点处死动物。断头取脑，制作石蜡切片。HE染色观察白细胞浸润。免疫组织化学方法检测NF-κB蛋白的表达。RT-PCR检测NF-κB mRNA的表达。TTC染色测梗死体积。共聚焦激光扫描显微镜(confocal laser scanningmicroscope，CLSM)结合FITC标记NF-κB p65亚基和PI标记细胞核的荧光双标技术对NF-κB进行定位和定量分析，显示其转录活性。 结果1． 脑缺血再灌注6h开始出现NF-κB蛋白及其mRNA的表达，NF-κB mRNA表达于12h达高峰而NF-κB蛋白表达于24h达高峰，之后逐渐减少，至7d时仍见有表达。正常组和假手术组未见NF-κB表达。生理盐水对照组NF-κB表达增加，与缺血再灌注24h亚组比较p＞0.05，无统计学差异。干预组，给予clasto-lactacyst in