【摘 要】
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micro RNA-167是通过生长素转录因子(ARF)调控生长素吲哚-3-乙酸(IAA)信号通路的重要的micro RNA之一。生长素的滥用会导致其在作物体内含量超标,影响作物生长发育,进一步将影响
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micro RNA-167是通过生长素转录因子(ARF)调控生长素吲哚-3-乙酸(IAA)信号通路的重要的micro RNA之一。生长素的滥用会导致其在作物体内含量超标,影响作物生长发育,进一步将影响食品和环境安全以及威胁人的健康。通过检测植物中micro RNA-167表达水平的变化可以反映植物生长素对植物生长水平的影响。因此,寻找一种检测植物micro RNA-167的方法至关重要。本文以micro RNA-167为检测对象,通过制备荧光纳米材料和荧光猝灭纳米材料,分别采用荧光共振能量转移法和比率荧光法构建荧光生物传感器,实现对植物中micro RNA-167的测定。本文研究内容主要包括以下两个部分:一、Ca2+辅助Fe3O4@PDA NP与CD-DNA之间的荧光共振能量转移检测micro RNA-167本实验设计了一种基于荧光共振能量转移(FRET)的策略测定micro RNA-167的荧光生物传感器。该FRET体系型荧光传感器,以碳量子点(CD)标记的DNA探针作为能量供体,磁性聚多巴胺纳米粒子(Fe3O4@PDA NP)作为能量受体,并利用Ca2+辅助作用及两次磁分离技术来提高传感器检测灵敏度。在最佳条件下,该生物传感器在0.5–100 n M范围内对micro RNA-167检测限为76 p M。该生物传感器有良好的选择性,可以用于拟南芥幼苗总RNA提取液样品中micro RNA-167的含量的测定。二、DNA模板的金纳米簇(DNA-AuNC)的制备及在micro RNA-167比率荧光传感中的应用本实验采用DNA模板法来制备AuNC,通过优化DNA模板序列及对合成AuNC的制备条件进行优化,制备了DNA模板化的AuNC(DNA-AuNC)。设计合成的DNA-AuNC荧光探针荧光性能良好,荧光强度高,稳定性好。在目标物micro RNA-167存在的条件下,探针上的DNA序列与micro RNA-167互补配对,形成双链结构;SYBR Green(SG)嵌入双链结构中后,构建了比率荧光传感器中,实现对目标micro NRA-167的测定。该传感器对micro RNA-167的检测线性范围为5–500 n M,检测限是1.26 n M。
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