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本试验旨在探索母猪日粮蛋白水平对仔猪断奶时脂肪沉积的影响以及Leptin对猪原代脂肪细胞的影响及机制。试验主要通过对脂滴包被蛋白(Perilipin)、脂肪分解酶和其他相关指标的检测来研究脂代谢的变化情况。1母猪日粮蛋白水平对断奶仔猪脂肪沉积的影响根据母猪日粮蛋白水平,试验分为对照组(妊娠期和哺乳期母猪日粮蛋白水平分别为12%和14%)和试验组(妊娠期和哺乳期母猪日粮蛋白水平分别为6%和7%),其后代仔猪断奶时采样。采样前测量仔猪体重及背膘厚度,采用放射免疫分析法测定背脂中Leptin激素水平,用相对定量实时荧光PCR方法检测仔猪脂肪组织中Leptin、LepR、HSL、ATGL、FAS mRNA表达,用免疫印迹(Western Blot)方法对Perilipin及其磷酸化蛋白进行定量,测定了脂肪分解酶(包括HSL和ATGL)的活力。结果显示：试验组仔猪体重及背膘厚度均低于对照组,背脂中Leptin激素水平也呈下降趋势。低蛋白组Leptin、ATGL、FAS的mRNA水平均降低,LepR、HSL没有变化。Perilipin,总蛋白水平在组间没有差异,但是试验组的Perilipin磷酸化水平呈现上升的趋势。试验组的脂肪分解酶的活力显著高于对照组。以上结果提示：母体日粮蛋白限饲对后代仔猪脂肪沉积的影响不仅降低了其脂肪合成能力,更主要是通过脂肪分解能力的提高来减少了脂肪沉积。2 Leptin对猪原代脂肪细胞的影响及其机制由断奶仔猪皮下脂肪分离血管基质细胞,增殖培养至80%融合,分化3天后,用10-8M、10-7M两个浓度分别进行短时(4h)和长时(48h)处理。用油红O染色法和免疫荧光细胞化学方法鉴定脂肪细胞、脂滴及脂滴包被蛋白,MTT方法检测细胞活力；用试剂盒测定培养液中甘油释放量,用相对定量实时荧光PCR方法检测细胞Perilipin、HSL和ATGL mRNA表达,免疫印迹(Western Blot)方法对Perilipin及其磷酸化蛋白进行定量,测定了脂肪分解酶(包括HSL和ATGL)的活力。结果显示,4h短时处理后,10-7M Leptin显著增加细胞活力,10-8M处理组没有变化；两个处理浓度组均显著促进细胞甘油释放量,但对脂肪分解酶的活性没有显著影响；10-7M Leptin处理组Perilipin、HSL、ATGL的mRNA表达均显著上调,10-8M Leptin只对ATGL的表达有促进作用；两个浓度处理组的Perilipin总蛋白表达量均没有显著变化,并且未检测到其磷酸化水平。48h长时处理后,10-7M Leptin显著增加细胞活力,10-8M处理组没有变化；两个处理浓度组均显著促进细胞甘油释放量；10-8M Leptin浓度组Perilipin mRNA表达显著下调,10-7M Leptin显著上调ATGL的mRNA表达；Perilipin总蛋白含量仅在10-7M实验组表达呈下降的趋势,而磷酸化Perilipin蛋白的含量在两个浓度处理组均显著上调。以上结果表明Leptin处理猪原代成熟脂肪细胞显著增加了脂肪细胞甘油释放量,4h处理能显著改变Perilipin以及脂代谢相关基因的表达,但Perilipin的磷酸化水平没有发生变化,48h处理后Perilipin的磷酸化水平发生显著提高,提示长时处理导致了成熟脂滴的分解,而短时处理引起的脂肪细胞甘油释放量的增加可能不是通过该途径实现的。