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目的:通过测定实验对象诱导痰中的TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3的浓度,并行细胞学分类计数,分离观察肺泡巨噬细胞Smad2/3的表达,分析TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3含量水平、痰细胞学分类与COPD患者肺功能的关系,初步探讨TGF-βs、肺泡巨噬细胞在COPD患者中的作用及临床意义。 方法:对在泸州医学院附属医院呼吸内一科住院治疗的14例COPD急性加重期患者、门诊或住院的15例COPD稳定期患者、8例正常志愿者分别测定肺功能FEV1%并行诱导痰检查,采用ELISA法测定其诱导痰液中TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3的含量水平;对得到的痰液标本进行细胞学分类计数,使用贴壁法从中分离提取出肺泡巨噬细胞并采用免疫荧光法标记Smad2/3并观察其表达。通过SPSS统计软件,分析TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、痰细胞学分类在诱导痰中的含量水平与肺功能之间的相互关系,探讨TGF-βs、肺泡巨噬细胞在COPD中的作用以及临床意义。 结果:1、参与实验的所有三组均能较好地耐受诱导痰检查,仅有一例COPD患者在检查过程中出现呼吸困难加重,但在给予沙丁胺醇200ug吸入后症状很快缓解,并最终完成诱导痰检查。2、对照组痰液中的细胞总数较COPD患者少,而AECOPD组患者的细胞总数同COPD稳定期组患者相比则更高(P<0.05)。COPD患者诱导痰细胞学分类均以中性粒细胞为主且AECOPD组患者的中性粒细胞比例高于COPD稳定期组,而在正常对照组中以巨噬细胞为主。AECOPD组患者诱导痰中嗜酸性粒细胞的比例低于COPD稳定期组及正常对照组(P<0.05),后两组中其比例则无显著的差异(P>0.05)。3、AECOPD组肺泡巨噬细胞数为(1.12±0.16)×106/L,COPD组(0.84±0.20)×106/L,对照组为(0.56±0.12)×106/L,三组AM数差异有统计学意义(P<0.05)。COPD稳定期组及AECOPD组患者诱导痰中肺泡巨噬细胞数与FEV1%成负相关(r=-0.597,-0.604,P<0.05)。4、在AECOPD组及COPD稳定期患者诱导痰中的肺泡巨噬细胞数与其中TGF-β1、TGF-β2的含量水平呈正相关。5、AECOPD组诱导痰中TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3的含量水平(178.00±11.67) ng/ml、(224.35±16.92) pg/ml、(152.38±9.13)pg/ml高于正常对照组(133.25±7.72)ng/ml、(148.35±8.91)pg/ml、(123.89±11.37)pg/ml,且急性加重期高于COPD稳定期(150.33±11.95)ng/ml、(184.94±13.35) pg/ml、(137.62±8.53) pg/ml(P<0.05)。6、AECOPD组、COPD稳定期组诱导痰TGF-β1、TGF-β2水平与FEV1%pred呈负相关,而TGF-β3与之呈正相关。AECOPD组中的r值分别为-0.560,-0.640,0.613,P<0.05,COPD稳定期组中r值分别为-0.689,-0.622,0.590,P<0.05。7、正常对照组的巨噬细胞中Smad2/3的平均荧光强度(22.14±4.25)低于COPD稳定期及急性加重期组,而AECOPD组患者巨噬细胞中Smad2/3的平均荧光强度(54.85±6.97)明显高于COPD稳定期组(38.19±5.64)。8、COPD患者诱导痰中TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3的表达与肺泡巨噬细胞Smad2/3平均荧光强度值呈正相关,其r值分别为0.620,0.616,0.488,P<0.05。 结论:1、COPD患者不同时期诱导痰中的肺泡巨噬细胞数、TGF-β1、TGF-β2以及TGF-β3的水平不同,且与肺功能有一定相关性,TGF-β三种亚型可能作用各不相同,但它们都可能在COPD患者气道重塑中发挥着重要作用,可以通过测定诱导痰中TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3的含量水平及肺泡巨噬细胞数间接估测患气流受限、急性加重等情况。2、COPD患者不同病理阶段诱导痰中肺泡巨噬细胞Smad2/3表达不同,且其表达强度与诱导痰中TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3的含量水平相关,推测TGF-β1,2,3-Smad2/3表达的增强是肺泡巨噬细胞参与COPD发生发展的重要原因之一。