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目的:研究粗糠柴霉素(Rottlerin)对膀胱肿瘤细胞生长抑制及其对膀胱肿瘤放射增敏的影响,并阐明其作用机制,为粗糠柴霉素联合放疗治疗膀胱肿瘤的临床应用提供理论依据。方法:四甲基偶氮唑盐实验(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT)测定粗糠柴霉素对EJ细胞生长的抑制效应;实时定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)筛选有效自噬相关基因Atg12的siRN A;透射电镜检测粗糠柴霉素及不同剂量放射线照射后处理后自噬体的形成情况;流式细胞技术检测粗糠柴霉素对细胞周期和细胞凋亡率影响;Western Blotting检测粗糠柴霉素处理后自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达,以及对凋亡相关蛋白Caspase-3,PARP表达的影响;同时用粗糠柴霉素和Atg12的siRNA和放射线联合作用后通过克隆形成实验计算存活分数,来判断到底是促进自噬还是抑制自噬能增加放疗敏感性。Western Blotting检测粗糠柴霉素和Atg12的siRNA联合放疗后自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达;流式细胞技术检测粗糠柴霉素联合放射线治疗后对细胞周期和细胞凋亡率影响;采用Western Blotting检测凋亡相关蛋白Caspase-3,PARP表达。结果:(1)经不同浓度(0,0.5,1,2,4,8,16μM)粗糠柴霉素分别处理24小时,48小时和72小时,EJ细胞增殖活力降低,0.5,1μM的粗糠柴霉素几乎对EJ细胞没有作用,浓度增加到2μM以上时(4,6,8,16μM)细胞存活率明显低于对照组,粗糠柴霉素对EJ细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖关系。(2)EJ细胞经2μM粗糠柴霉素处理48小时后,克隆形成实验发现粗糠柴霉素可以减少EJ细胞的克隆形成数。和对照组相比它可降低EJ细胞形成克隆的能力。(3)EJ细胞经2μM粗糠柴霉素处理48小时后,Western Blotting检测粗糠柴霉素处理后自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达增高,透射电镜检测自噬体形成增多。(4)EJ细胞经过放射线不同剂量照射后,通过计算生存分数,粗糠柴霉素可以提高EJ细胞的放射敏感性,2Gy即可轻度增加放射敏感性,但从4Gy开始放射敏感性增加较明显。siRNA与x-射线联合作用显示效果不是很明显,但是也有轻度抑制辐射的细胞杀伤效果。(5)粗糠柴霉素处理EJ细胞受到2Gy、4Gy射线照射24小时后,和单纯受到2Gy、4Gy射线照射的EJ细胞相比均发生G1期阻滞。而单纯放射线照射和未照射的细胞相比,细胞周期的阻滞发生在G2期。(6)细胞受到2Gy、4Gy照射的凋亡率分别为5.55%、16.88%,说明EJ细胞对于放射治疗具有一定的抗性,但是粗糠柴霉素联合x射线处理细胞后使细胞的凋亡率明显增加,2Gy、4Gy照射的凋亡率分别达到65.5%、72.43%。(7)对照组和2μM粗糠柴霉素处理EJ细胞24小时后,细胞受到2Gy射线照射,照射完成后接着培养24小时,Caspase-3、PARP和活化的Caspase-3、PARP在粗糠柴霉素处理前后并无明显的变化。同样在放射线照射前后也无明显变化。结论:以上研究结果说明,粗糠柴霉素具有抑制膀胱肿瘤细胞生长的作用,和x-ray联合应用可提高膀胱肿瘤的放疗效果。