前言 生酮饮食(ketogenic diet，KD)是一种高脂肪、低蛋白质和低碳水化合物的饮食，用于治疗难治性癫痫，特别是儿童难治性癫痫。有关KD的临床研究国外已有七十余年的历史，该方法比较安全、疗效确切。KD的动物实验研究，尤其是其作用机制的研究正成为国外癫痫治疗研究的热点之一，目前国内文献尚未检索到相关的临床或动物实验报道。本研究参照国外相关文献资料，通过对KD饲养的幼鼠采用戊四氮(Pentylenetetrazole，PTZ)诱导痫性发作阈值的测定及点燃后其海马病理改变的观察，探讨和验证KD对实验幼鼠的抗痫作用，同时观察KD对幼鼠痫性发作强度的影响。 材料和方法 健康生后25-30天Wistar幼鼠40只，体重90-120克，雌雄各20只，由沈阳市药品检验所实验动物中心提供。按随机表法则随机分为生酮饮食喂养实验组和常规饮食喂养对照组，每组20只。每只鼠放于一笼单独喂养，实验室温度控制在20℃左右。12小时昼夜亮暗周期。动物禁食12小时后，对照组和生酮饮食组分别饲以普通饲料和生酮饮食饲料。大鼠的普通饲料由沈阳市于洪乡动物饲料厂提供，符合大鼠生长发育所需的各种营养成视准。生酮饮食饲料的脂肪主要来源于动物，本实验参照Freeman等的方案采用的是猪油，按4：二比例＊肪与碳水化合物及蛋白质的重量比）混合于大鼠普通饮食中（由营养师协助配制人动物自由饮用自来水。两组幼鼠分别在饲养10天后进行实验观察。通过尾静脉输注pZuigm。公司生产）来进行化学诱导病性发作。将300mg pZ溶于30Inl生理盐水中配成新鲜的 PIZ溶液，浓度为10m4ml。IqZ溶液通过输液泵以恒定的速度即1．ondlnin输人大鼠尾静脉。PIZ诱导痫性发作所需的阈剂量以大鼠产生双侧前肢阵挛一强直所需时间为标准进行换算，此时停止输液，记录输注时间及动物病性发作的行为评分。此后，用PIZ按亚致癌量问7．sin才g）隔日上午分别给两组动物腹腔注射，直到达到点燃状态。两组动物均达到点燃状态后，将动物常规麻醉灌流固定，断头取脑，取海马标本制成光镜切片JE染色。光镜下观察比较海马结构的细胞形态学改变。分别计数两组动物海马CA3区正常神经细胞数。各组数据均取平均值，用均数上标准差如土8）表示，两组间差异用t检验做差异显著性分析。 实验结果 1．动物及饮食情况摄取生酮饮食饲料组的动物在实验过程中，进食良好，没有不健康迹象。对照组动物体重增长略高于实验组，即至实验结束时普g饲料对照组体重平均增长约100克，生酮饮食饲料喂养组平均增长约90克，差异无统计学意义。 2．生酮饮食对病性发作阈值及病性发作强度的影响生酮饮食饲料喂养10天后，生酮饮食饲料喂养组动物的病性发作阈值明显提高，两组间经统计学分析具有显著性差异u＜o．01人尽管生酮饮食可以提高病性发作阈值，延迟PIZ诱导的病性发作产 ·2·生，但它对病性发作的强度没有明显影响。两组动物m诱导痫性发作强度评分拥J为：实验组二．30。0．19；对照组二．37 S 0．2一两组间差异无统计学意义瞩＞o．仍人 3．病理形态学观察光镜下生酮饮食喂养组和对照组大鼠的海马CAI区人A3区及齿状回神经细胞发生明显变性坏死，主要表现为锥体细胞的固缩性坏死，深染，呈三角形。胞浆染色深，空泡形成，尼氏小体减少以至消失，细胞核浓缩，深染，核仁不明显。一部分神经细胞肿胀，呈圆形。胶质细胞水肿。上述改变对照组较KD组更为明显，程度更严重。两组动物海马CA3区正常锥体细胞计数显示生酮饮食喂养组数目明显高于对照组，两组间差异具有统计学意义u功．01人 讨 论 KD最早是由模仿饥饿时产生酮血症状态设计发展而来。传统的KD（即本实验所采用的KDu肪主要来源于动物，脂肪与蛋白质加碳水化合物的重量比为4：＊饮食中的脂肪消耗所致酮血症是KD具有抗惊厥作用的基础。临床和动物实验显示，饲以KD5—7天后实验对象即可产生稳定的酮血症水平并具有抗惊厥作用和对痛性发作有保护作用。只要坚持这样的饮食，这种状态就可以一直保持下去。需要特别提及的是，大量的临床实验证实：m应用于儿童难治性癫痛显示了更显著更安全的疗效。这是由于儿童较成人更易获得持久稳定的酮病状态，而大脑利用酮体的能力随年龄的增加而下降。因此，本研究采用了生后30天大鼠，饲以KD10天，也收到了较好的实验效果。 选择WZ尾静脉输注法为病性发作的诱导方法，是因其可获得明确的、显而易见的痛性发作阈值。给予大鼠尾静脉输注册致惊剂量，一般在给药后数分钟约97％的动物可产生痉挛性抽 ·3·动。p主要作用于脑干及大脑，使兴奋性突触的易化过程增加，容易发生惊厥，其阈剂量是以引起动物头部及前肢抽动为标准。 本研究发现人D组大鼠痛性发作阈值明显高于对照组动物。两组间统计学分析具有显著性差异，但两组动物的痛性发作强度没有明显?