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趋化因子作为肿瘤微环境重要的组成要素,不但在炎症的发生、血管的生成、免疫应答等过程中发挥重要作用,而且还能介导肿瘤的生长、侵袭以及转移等,是肿瘤发生、发展中重要的调控因子。趋化因子18(CC chemokineligand 18,CCLI8)是一种属于CC型的趋化因子,最早是在肺部组织中被鉴定。CCL18主要由树突状细胞和肿瘤相关巨噬细胞TAM所分泌。TAM是肿瘤微环境中重要的免疫细胞,具有促进血管生成与促进肿瘤发生发展的作用,与肿瘤患者的预后呈负相关。CCL18已经成为指示肿瘤相关巨噬细胞产生的重要标志。近些年的研究发现,CCL18能够与乳腺癌细胞膜上的受体PITPNM3结合,通过促进整联素的聚集,并增强肿瘤细胞与胞外基质的粘附,从而促进乳腺癌细胞的侵袭。CCL18与受体PITPNM3的结合还能够激活Akt-LIMK-cofilin信号通路,从而促进由微丝调控的细胞骨架的重排,也能够通过PI3K-Akt-GSK3β-Snail信号通路诱导发生上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT),从而促进乳腺癌细胞的侵袭和转移。研究中我们发现了一个新的CCL18信号通路的效应因子,ACAP4。MDA-MB-231细胞中,在CCL18的刺激下ACAP4能够被乙酰转移酶PCAF所乙酰化,并且我们鉴定了这一乙酰化位点为ACAP4的第311位赖氨酸。进一步的研究发现,ACAP4的K311位的乙酰化能够降低ACAP4与磷脂酰肌醇的结合,同样也能够消弱ACAP4在质膜上的分布。通过对ACAP4的乙酰化调控能够实现ACAP4在质膜与胞质之间的循环。在本课题组早前的研究中发现,Acapin是一个全新的ACAP4结合蛋白,Acapin能够与Arf6竞争性结合ACAP4,从而抑制ACAP4对Arf6 GTPase活性的调控。在本课题研究中发现,ACAP4的模拟乙酰化能够增强ACAP4与Acapin的结合,但不影响ACAP4与Arf6的直接结合,Acapin竞争性的结合乙酰化的ACAP4从而抑制ACAP4对Arf6 GTPase活性的调控,并在乳腺癌细胞的迁移中发挥重要作用。目前,我们正在研究乙酰化在CCL18调控的细胞迁移中的作用,未来我们将进行动物实验以评估PCAF在CCL18介导的肿瘤转移中的影响。可逆的蛋白磷酸化修饰已成为有丝分裂过程中动点-微管连接纠错的重要调控机制。蛋白激酶Aurora B-磷酸酶PP1信号轴在其中发挥了及其重要的作用。Aurora B作为CPC复合体的重要一员,主要通过磷酸化调控KMN复合体来发挥动点-微管连接错误纠正作用。Aurora B定位于动点内层,并能够形成由内层到外层的激酶活性梯度。在错误的动点-微管连接方式下,姐妹染色体之间因为没有张力存在而使得动点内层之间的距离很近,因此,位于动点内层的Aurora B能够更加接近KMN复合体,使得更多的KMN被Aurora B磷酸化。Aurora B对KMN复合体相关蛋白的磷酸化会降低错误连接的微管-动点的结合能力,从而将连接纠正到双极定向模式。而蛋白磷酸酶PP1能够被KNL1招募到动点并对Aurora B的磷酸化底物KMN等进行去磷酸化,从而起到稳定动点-微管连接的作用。糖原合成酶激酶3(GSK3(3)作为一个多功能的蛋白激酶在动点-微管的连接中具有重要作用,但调控机理还未得到很好的阐明。在我们的研究中,我们鉴定了蛋白激酶GSK3β的一个新的磷酸化底物,PP1γ。GSK3β能够磷酸化蛋白磷酸酶PP1γ,同时鉴定出GSK3(3磷酸化PP1γ的位点为其羧基端的307和311位苏氨酸,PP1γ的T307/T311位的磷酸化促进PP1γ与Aurora B的结合,PP1γ的T307/T311位的模拟磷酸化还能够促进Aurora B T232位磷酸化水平的上升。我们的研究表明体内存在GSK3(3-PP1γ-AuroraB这一信号轴,为揭JT GSK3β调控动点-微管连接的分子机制提供了研究方向。