磁性纳米颗粒的制备以及在生物样品分离纯化中的应用

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本论文围绕着生物样品的磁性固相吸附分离纯化技术展开了研究。研究工作包括两个部分:超顺磁性纳米颗粒的制备及在DNA样品分离纯化中的应用,超顺磁性纳米颗粒的表面修饰及在RNA和蛋白质分离纯化中的应用。  第一部分,利用化学合成的方法制备出具有超顺磁性的纳米颗粒,并用二氧化硅和三氧化二硼复合包裹磁性纳米颗粒,很大程度上改进了包裹层的物理化学稳定性,克服现有的单纯以二氧化硅为包裹材料的磁性纳米颗粒在偏酸性环境易泄漏的问题。通过对多种样品DNA分离纯化,并和经典的酚/氯仿/异戊醇传统提取纯化方法比较,证实了复合包裹的磁性纳米颗粒分离纯化DNA样品具有良好的效果,通过一系列的后续实验证明了提取的DNA样品能够满足大部分分子生物学实验的需要。最后通过建立自动化提取体系,进一步减少了操作要求并缩短了操作时间,从而建立起一个方便、快捷、经济而又高通量的DNA提取体系。  第二部分,在第一部分的基础上,通过改变体系环境和对超顺磁性纳米颗粒表面的修饰改造,扩大该体系的应用范围。通过调整结合缓冲液成分和pH值将该体系应用于血清中的病毒RNA的分离纯化,通过在磁性颗粒表面修饰链霉亲和素将该体系应用于外周血标本mRNA的分离纯化,通过在磁性颗粒表面修饰NTA-Co2+将该体系应用于6×His-tag融合蛋白的分离纯化。通过实验验证,都取得了理想的分离纯化效果。由于该磁性颗粒表面能够很容易地修饰大量功能基团,因此具有广阔的技术延伸前景。
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