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本试验应用猪肺炎支原体弱毒株分别通过肌肉注射、肺内注射以及鼻腔免疫等三种方式免疫长白×大约克二元杂交猪,研究呼吸道局部和全身免疫水平的变化。选取6窝新出生的仔猪,随机分为6组,7日龄首免,鼻腔免疫组10日龄二免,期间正常饲养,首免后42天宰杀。通过检测气管和气管叉上皮内淋巴细胞(IEL)的数目,鼻腔分泌物中细胞因子IL-6、IL-10和IFN-γ分泌水平及肺与肺门淋巴结中CD4+、CD8+T淋巴细胞的面积来探讨猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫对仔猪呼吸道局部细胞免疫水平的影响；通过检测鼻黏膜、气管IgA、IgG分泌细胞的面积,鼻腔分泌物及气管、鼻黏膜和肺组织中猪肺炎支原体特异性SIgA抗体水平来探讨猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫对呼吸道局部体液免疫水平的影响；通过检测血清中猪肺炎支原体特异性IgG抗体水平来探讨猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫对全身免疫水平的影响。1.猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫对仔猪呼吸道局部细胞免疫水平的影响应用HE染色方法显示猪气管和气管叉上皮内淋巴细胞分布和数量变化,结果表明：应用CpG配合猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫后,气管和气管叉上皮内淋巴细胞数目均显著增加(P<0.01),肌肉注射与肺内注射猪肺炎支原体弱毒株也能显著增加气管叉上皮内淋巴细胞数目(P<0.05)。应用ELISA试剂盒检测鼻腔分泌物中细胞因子IL-6、IL-10及IFN-γ水平。结果表明：首免后第3天,应用CpG配合猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫能够显著提高IL-6、 IL-10及IFN-γ水平(P<0.01),肌肉注射猪肺炎支原体弱毒株能够显著提高IL-6、IL-10水平(P<0.01),肺内注射能够显著提高IL-6及IFN-γ水平(P<0.01)。首免后第5天,应用CpＧ配合猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫能够显著提高IL-6IL-10及IFN-γ水平(P<0.01),肺内注射猪肺炎支原体弱毒株也能显著提高IL-6IL-10及IFN-γ水平(P<0.01),肌肉注射能够提高IFN-γ水平(P<0.01),但效果并不及猪肺炎支原体弱毒株配合CpG鼻腔免疫组。应用SABC免疫组化方法显示肺和肺门淋巴结CD4+、CD8+T淋巴细胞,结果表明：应用CpG配合猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫能够显著增加肺及肺门淋巴结中CD4+、CD8+T淋巴细胞面积(P<0.01),肌肉注射及肺内注射猪肺炎支原体弱毒株同样能够显著增加肺及肺门淋巴结中CD4+T、CD8+T淋巴细胞面积(P<0.05或P<0.01)。而单独应用猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫也能够增加肺门淋巴结CD4+、CD8+T淋巴细胞面积(P<0.01),但效果均不及猪肺炎支原体弱毒株配合CpG鼻腔免疫组。以上结果提示,应用CpG配合猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫可有效诱导仔猪呼吸道局部细胞免疫应答。2.猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫对仔猪呼吸道局部体液免疫水平的影响应用间接ELISA方法检测鼻腔分泌物中猪肺炎支原体特异性SIgA抗体水平,结果表明：首免后前两周,应用CpG配合猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫能够显著提高鼻腔分泌物中特异性SIgA抗体水平(P<0.01)；首免后第3周和第5周,肺内注射猪肺炎支原体弱毒株能够显著提高鼻腔分泌物中特异性SIgA抗体水平(P<0.01)；第4周,应用CpG配合猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫及肺内注射都能显著提高鼻腔分泌物中特异性SIgA抗体水平(P<0.01或P<0.05)。应用SPA-HRP间接染色法显示鼻黏膜、气管IgA、IgG分泌细胞。结果表明：应用CpG配合猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫能够显著增加鼻黏膜和气管IgA、IgG分泌细胞的面积(P<0.01),肌肉注射也能够在一定程度上促进鼻黏膜和气管IgA、IgG分泌细胞的面积增加(P<0.01),但仍显著低于猪肺炎支原体弱毒株配合CpG鼻腔免疫组。肺内注射并不能有效增加鼻黏膜和气管IgA、IgG分泌细胞的面积。应用间接ELISA方法检测鼻黏膜、气管和肺组织特异性SIgA抗体水平,结果表明：单独应用猪肺炎支原体弱毒株或与CpG配合鼻腔免疫能够显著提高鼻黏膜及肺组织中特异性SIgA抗体的水平(P<0.05),肌肉注射与肺内注射猪肺炎支原体弱毒株同样能够显著提高鼻黏膜及肺组织中特异性SIgA抗体的水平(P<0.05)。应用CpG配合猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫及肌肉注射猪肺炎支原体弱毒株能够显著提高气管特异性SIgA抗体水平(P<0.01)。以上结果提示,应用CpG配合猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫可有效诱导仔猪呼吸道局部体液免疫应答。3.猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫对仔猪全身免疫水平的影响应用ELISA试剂盒检测血清中猪肺炎支原体特异性IgG抗体水平,结果表明：免疫初期,对照组、单独CpG及单独猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫组血清中特异性IgG抗体水平显著高于鼻腔免疫猪肺炎支原体弱毒株配合CpG组及肺内注射和肌肉注射组,但随着仔猪日龄增长,抗体水平持续下降,在免疫后35天降至最低。肺内注射组抗体水平在免疫后较稳定,一直维持在较低水平,肌肉注射组抗体水平在免疫后14天略有上升,但随后持续下降。而鼻腔免疫猪肺炎支原体弱毒株配合ＣpG组在免疫后第21天抗体水平降至最低,之后优势逐渐发挥,抗体水平持续上升,在第35天已经显著高于其他组。结果提示,应用ＣpG配合猪肺炎支原体弱毒株鼻腔免疫在免疫后期能够在一定程度上诱导全身免疫应答。