本实验以猪附红细胞体(Eperythrozoon suis)为研究对象，扩增了E．suis16SrRNA基因，研制了猪附红细胞体PCR诊断试剂盒，并应用该试剂盒对广东省的猪附红细胞体病进行了分子流行病学调查。 对姬姆萨染色初步确诊为E．suis感染的两份阳性血样，以文献报道的方法分离纯化E suis，抽提基因组DNA，使用能扩增大多数真细菌16S rRNA基因的通用引物fHf1/rHf2进行E．suis16S rRNA基因扩增，对扩增产物进行克隆、测序和序列分析。结果从两份E suis感染阳性血样中均成功地扩增出长度为1469 bp的核苷酸片段。将所获序列用BLAST程序与GenBank中收录的各种微生物序列进行比对分析，结果表明与国内报道的E suis广东株和国外报道的E suis Illinois株、Zachary株16S rRNA基因序列高度相似。运用DNASTAR5.0软件的多序列比对程序，将本次所测得的序列与Genbank中所收录的猪和其他动物的附红细胞体、血巴尔通氏体的16S rRNA基因序列进行比对，结果表明两个样品所获得的序列与E.suis广东株之间的相似性分别为99.7％和99.5％。而两个样品和E. suis Illinois株以及E. suisZachary株之间的相似性均在95％左右，进一步表明了广东所流行的E suis与国外报道的E. suis具有一定的遗传差异。 根据实验所得的E. suis 16S rRNA基因的序列，设计合成种特异性引物，以E.suis 16S rRNA基因的重组质粒作为阳性参照，通过对PCR反应条件的优化，研制了猪附红细胞体PCR诊断试剂盒。试剂盒由以下各部分组成：PCR反应液10管，每管22.75μl；琼脂糖1.0g；EB(10μg/μl)50μl；6×loading buffer 50μl．rTaq酶(5U/μl)5μl；阳性对照一支，20μl。其中PCR反应液主要包括10×PCR Buffer，终浓度为4mmol/L的MgCl<,2>，终浓度为50mmol/L的引物P1/P2和终浓度为200μlmol/L dNTPs。分别对该试剂盒的特异性，敏感性，重复性，稳定性和保存期进行了系统的研究。在特异性实验中仅E.suis基因组DNA能扩增出约为419bp的特定片段，而对猪丹毒丝菌、猪链球菌、多杀性巴氏杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪肺炎支原体、鸡毒支原体和猫血巴尔通氏体的基因组DNA没有扩增带出现；试剂盒对模板DNA的最低检出量是0.23fg；反复冻融50次对试剂盒的检测结果没有影响，试剂盒在-20℃的保存期至少在9个月以上，具有良好的稳定性；重复性实验中4个不同批次的试剂盒对7份E suis阳性样品均能扩增出明亮的目的条带，而对10份阴性样品的PCR扩增结果全为阴性。上述实验结果证明该试剂盒的各项指标基本达到了猪附红细胞体PCR检测的要求。应用该试剂盒对广东省佛山地区的208份临床病猪血样和从广州某屠宰场采集的117份临床健康猪血样进行了猪附红细胞体感染情况的检测，其中8份临床病猪血样和1份临床健康猪血样的检测结果为阳性。检测结果显示该试剂盒具有特异性强、准确性高、操作方便、快速，结果判断直观等特点，适用于猪附红细胞体病的临床检测和流行病学调查，对猪附红细胞体病的诊断与防治具有重要的意义。